Yaohai Bio-Pharma prepara il circRNA basato sul sistema PIE (allineamento di esoni e introni), che si basa sulla funzione di auto-giunzione degli introni di tipo I per ottenere la ciclizzazione dell'RNA. La struttura PIE è progettata utilizzando il gene T4 td o il gene precursore del tRNA di pesce e la disposizione è la seguente:
L'introne dell'RNA e il frammento dell'esone di supporto sono divisi in due parti (terminale 5' e terminale 3'), dove la sequenza terminale 5' viene trasferita alla coda della sequenza bersaglio, la sequenza terminale 3' viene inserita nella parte anteriore del sequenza bersaglio e la sequenza del gene bersaglio è inserita al centro.
Sotto la catalisi del GTP, la struttura PIE porta alla ciclizzazione di sequenze diverse dagli introni. In combinazione con una ragionevole strategia di miglioramento del tasso di ciclizzazione, Yaohai Bio-Pharma può ottenere la ciclizzazione di sequenze fino a 4 kb con un tasso di ciclizzazione superiore all'80%.
Figura 1. Circolazione in vitro di circRNA basata sul sistema PIE
Dettagli sui servizi
| Processo | Servizio opzionale | i dettagli del servizio | Periodo di consegna (giorni lavorativi) |
| Progettazione e ottimizzazione della sequenza di circRNA | Progettazione e ottimizzazione di sequenze di codifica | Allineamento della sequenza CDS Ottimizzazione del codone CDS | 1 |
| Progettazione e ottimizzazione di sequenze non codificanti | Progettazione e ottimizzazione di sequenze di introni ed esoni Progettazione e ottimizzazione di sequenze di bracci omologhi Progettazione e ottimizzazione della sequenza degli spaziatori | 1-2 |
Strategie comuni per la progettazione di sequenze di mRNA
| Componenti del CircRNA | Funzioni biologiche | Strategie di ottimizzazione |
| Sequenze di introni ed esoni a due terminali | Auto-splicing dell'introne catalizzato da GTP per la ciclizzazione di sequenze all'esterno dell'introne. | Progettato secondo il gene T4 td o il gene precursore del tRNA dell'olio di pesce. |
| codifica | IRES | Sito interno di riconoscimento dei ribosomi che regola la traduzione del circRNA. | Screening delle sequenze del sito di ingresso ribosomiale interno (IRES) da diverse fonti virali, ad esempio fonti EMCV, CVB3. |
| CDS | Regioni codificanti proteine, sequenze codificanti per antigeni, anticorpi o altre proteine funzionali. | L'ottimizzazione del codone aumenta il livello di traduzione; alcuni codoni non ottimali possono svolgere un ruolo nel ripiegamento delle proteine. |
| Non codificante | Sequenze non codificanti | Mira ai miRNA o alle proteine per esercitare la regolazione genica o proteica. | Prendendo di mira siti di legame specifici per miRNA o proteine è possibile ripetere le sequenze del sito di legame. |
Le nostre caratteristiche
- Sistema di ciclizzazione PIE ottimizzato Combinazione con strategie di ottimizzazione ragionevoli per ottenere un tasso di ciclizzazione superiore all'80%;
- Team di ottimizzazione CDS all'avanguardia Cooperazione con un team di algoritmi AI professionale per completare l'ottimizzazione dei codoni della regione CDS;
- Il circRNA di processo maturo e perfetto può essere ottenuto con elevata efficienza di ciclizzazione, elevata stabilità ed elevata efficienza di traduzione.
Caso di studio
Yaohai Bio-Pharma ha lanciato il prodotto di controllo circRNA della proteina fluorescente verde potenziata (eGFP), che si basa sul sistema PIE per ottenere la ciclizzazione dell'RNA.
Utilizzando un reagente di trasfezione convenzionale, il circRNA eGFP viene trasfettato in cellule 293T e il segnale fluorescente eGFP (verde) può essere rilevato dopo 24 ore, che verrà potenziato dopo 48 ore. Il segnale fluorescente può ancora essere rilevato il 7° giorno e il 14° giorno successivo trasfezione.
Convalida dell'espressione in vitro del circRNA eGFP
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