I prodotti ottenuti mediante ciclizzazione in vitro e arricchimento con RNasi R richiedono un'ulteriore rimozione dalla trascrizione in vitro (IVT), inclusi substrati non consumati nella reazione di ciclizzazione, sottoprodotti della reazione e RNA intaccato.
Yaohai Bio-Pharma dispone di precipitazione di LiCl maturo, purificazione di sfere magnetiche, purificazione autosviluppata e altre soluzioni di purificazione diversificate per rimuovere efficacemente varie impurità e preparare circRNA altamente puro.
Soluzione di purificazione per piccole quantità di circRNA per la trasfezione cellulare e come parte di esperimenti su animali.
Soluzione di purificazione per piccole quantità di circRNA per la trasfezione cellulare e come parte di esperimenti su animali.
Scenari applicativi di qualità superiore;
Processo di purificazione stabile e scalabile per soddisfare i requisiti di produzione GMP.
Processo | Servizio opzionale | i dettagli del servizio | Periodo di consegna (giorno) | Risultati finali |
circRNApurificazione | Soluzione di purificazione convenzionale | Precipitazione del cloruro di litio | 1 | sostanza farmaceutica circRNA |
Purificazione delle sfere magnetiche | ||||
Purificazione del circRNA altamente pura | Cromatografia liquida preparativa ad alte prestazioni (HPLC) | 1-2 | ||
Scambio di buffer | Ultrafiltrazione | 1 | ||
controllo di qualità del circoRNA | Concentrazione/purificazione | Spettrofotometria ultravioletta (UV). | 0.5 | Rapporto di prova |
Purezza | Elettroforesi su gel di agarosio (AGE)/E-gel | |||
HPLC opzionale | 1 |
È possibile realizzare scenari applicativi.
circRNA con una purezza superiore al 90%;
Attraverso un controllo rigoroso delle RNasi nell'ambiente sperimentale e nei materiali di consumo, la degradazione dell'RNA viene efficacemente prevenuta.
Yaohai Bio-Pharma ha creato una soluzione matura di purificazione del circRNA in grado di rimuovere efficacemente varie impurità legate al processo.
I prodotti di RNA circolare purificati mediante la soluzione convenzionale sono ancora ovviamente mescolati con RNA intaccato e introni.
Dopo la soluzione di purificazione sviluppata da Yaohai Bio-Pharma, varie impurità dell'RNA lineare, come l'RNA intaccato e gli introni, possono essere rimosse con successo.
Convalida dell'espressione circRNA
Utilizzando un liposoma convenzionale, il circRNA eGFP purificato viene trasfettato in cellule 293T e dopo 24 ore si osserva un segnale di fluorescenza che continua ad essere potenziato a 48 ore. Il segnale di fluorescenza può ancora essere rilevato il 7° e il 14° giorno dopo la trasfezione.