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progettazione della sequenza di mRNA

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RNA IVT

progettazione della sequenza di mRNA

In base al dogma centrale, il messaggero RNA (mRNA) è il ponte per la trasmissione del materiale genetico dal DNA alle proteine.

il mRNA svolge un ruolo biologico codificando proteine in vivo, e l'mRNA maturo negli organismi eucariotici è composto da cinque componenti: 5' Cap (struttura del cap), 5' UTR (regione non codificante), ORF (frammento di lettura aperto), 3' UTR e coda polyA 3' (coda poliadenilata).

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Dettagli dei Servizi
Processo Servizio Opzionale Dettagli del servizio Periodo di Consegna (giorni)
progettazione e ottimizzazione della sequenza mRNA Progettazione e ottimizzazione delle sequenze codificanti

Allineamento della sequenza CDS

Ottimizzazione del codone CDS

1
Progettazione e ottimizzazione di sequenze non codificanti

progettazione e ottimizzazione della sequenza del 5' UTR

progettazione e ottimizzazione della sequenza del 3' UTR

progettazione e ottimizzazione della sequenza polyA

1-2
Opzioni personalizzabili
5' UTR/3' UTR
  • Sequenza UTR naturale
  • Sequenza UTR mutante/ingegnerizzata
coda PolyA 3'
  • coda di 100A ~120A (consigliata)
  • Coda polyA segmentata
  • Altra coda personalizzata
Strategie comuni per la progettazione della sequenza di mRNA
componenti mRNA Funzioni biologiche Strategie di ottimizzazione
cappuccio 5' Proteggere l'mRNA dalla degradazione da parte degli esonucleasi e agire in sinergia con la coda polyA alla fine 3', la proteina di legame polyA e il fattore di inizio traduzione per avviare la traduzione proteica. La struttura naturale Cap1 evita i recettori di riconoscimento dei pattern e quindi riduce la risposta immunitaria naturale, che può essere ottenuta tramite cappatura co-trascrizionale in un passaggio o cappatura enzimatica in due passaggi [vedi cappatura enzimatica mRNA e cappatura co-trascrizionale per dettagli].
uTR 5' L'UTR 5' può essere riconosciuto dai ribosomi, regolare la traduzione dell'mRNA e influenzare la stabilità dell'mRNA. Contiene sequenze Kozak senza una struttura secondaria molto stabile. Gli UTR naturali di geni altamente espressi sono preferiti per la trascrizione in vitro (IVT) delle mRNA, come α-globina e β-globina.
CDS Regioni codificanti proteine e sequenze codificanti per antigeni, anticorpi o altre proteine funzionali. L'ottimizzazione del codone aumenta il livello di traduzione, notando che alcuni codoni non ottimali possono svolgere un ruolo nella piegatura della proteina.
3' UTR Regolano la traduzione del mRNA e la sua stabilità. Gli UTR naturali di geni altamente espressi sono preferiti per i mRNA IVT, come α-globina e β-globina.
codale polyA 3' Regolano l'espressione della proteina e proteggono la struttura del cappuccio dalla degradazione. È richiesta una lunghezza adeguata (100-150 bp); la codifica della coda polyA sul plasmide modello di trascrizione garantisce una lunghezza più definita della coda polyA.
Le nostre caratteristiche
  • Selezione diversificata della fonte UTR

Fonti multiple di biblioteche UTR naturali e modificate altamente espressi; strategia di modifica UTR matura;

  • Team di ottimizzazione CDS all'avanguardia

Collabora con un team di algoritmi AI professionale per completare l'ottimizzazione dei codoni.

  • Distribuzione uniforme della coda polyA

Aggiungi sequenze polyA in base ai template DNA per controllare la lunghezza del mRNA in modo più preciso.

  • Combinazioni di ottimizzazione variegate

Raggiungere un'espressione efficiente di mRNA con bassa immunogenicità.

Studio di caso

Progettazione di una mRNA a doppio reporter: mRNA mCherry-eGFP

Il servizio mRNA di Yaohai Bio-Pharma continua ad essere aggiornato con il progetto e l'ottimizzazione di una sequenza tandem di doppio gene reporter, che consente la co-espressione di due geni.

Utilizzando un reagente di trasfusione convenzionale, la mRNA mCherry-eGFP con sequenza tandem di doppio gene viene trasfusa in cellule 293T, e dopo 48 ore vengono rilevati due segnali fluorescenti di mCherry (rosso) e proteina fluorescente verde migliorata (eGFP) con espressione simultanea, e il grafico sovrapposto è evidenziato in giallo.

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Espressione di mRNA mCherry-eGFP nelle cellule 293T

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