Plasmide DNA, come in vitro modello per la trascrizione in vitro (IVT), è un materiale grezzo importante per la produzione di mRNA. Alto rendimento, alta purificazione e alta recupero del plasmide DNA sono i principali fattori obiettivo durante lo sviluppo del processo del plasmide.
Yaohai Bio-Pharma offre una soluzione completa per lo sviluppo di plasmidi, inclusi processi upstream (fermentazione), downstream (purificazione), caratterizzazione del processo e validazione del processo. Abbiamo un'ampia esperienza nello migliorare il rendimento dei plasmidi ed isolandoli da matrici complesse attraverso lo sviluppo e l'ottimizzazione dei processi di fermentazione, purificazione e rimozione delle impurità.
Il processo biologico di base per la produzione di plasmidi include: Escherichia coli (E. coli) fermentazione, raccolta cellulare e lisi alcalina, chiarificazione, concentrazione, processo cromatografico a tre passaggi (cattura, purificazione intermedia e lucidatura) e concentrazione.
Dettagli del servizio | Operazioni Unitarie | Parametri |
E. coli fermentazione |
Flask per scuotimento | Composizioni del mezzo, antibiotico, volume dell'inoculo, temperatura di crescita e altro. |
Fermentatore (7 L) |
Antibiotico, volume dell'inoculo, temperatura di crescita, pH, ossigeno disciolto (DO), modalità di alimentazione (es. batch con aggiunta continua), mezzi di alimentazione, tempo di fermentazione e altro. |
|
Raccolta delle cellule | Microfiltrazione | Standard E. coli processo di raccolta |
Lisi cellulare | Risospensione cellulare, lisi alcalina, neutralizzazione | Rapporto di alcalinità, tempo di lisi |
Chiarificazione | Filtrazione | Filtrazione grezza, 20 µm e un filtro a 5 µm (preferito) |
Concentrazione | Ultrafiltrazione, filtri a flusso tangenziale | Dimensione delle pori (o NMWC), Pressione transmembrana (TMP), Flusso, rapporto tra volume del filtrato e area della membrana |
Cromatografia in tre fasi | Cromatografia di esclusione dimensionale (SEC) o cromatografia di filtrazione su gel (GFC) | Lunghezza e diametro della colonna, composizione del tampone, volume di iniezione, composizione della fase mobile (adsorbimento e desorbimento), pH, velocità di flusso, condizioni di equilibrio, legame, lavaggio ed eluizione. |
Cromatografia per affinità (AF) | ||
Cromatografia per scambio anionico (AEX) | ||
Concentrazione | Ultrafiltrazione, filtri a flusso tangenziale | Dimensione delle pori (o NMWC), Pressione transmembrana (TMP), Flusso, rapporto tra volume del filtrato e area della membrana |
Più soluzioni per il processo di purificazione dei biologici |