La base dell'incapsulazione è la progettazione e lo sviluppo del sistema di recapito. Un sistema di recapito ben progettato consente alle molecole di circRNA di entrare nel corpo senza essere degradate dalle enzime RNA e poi essere efficacemente recapitate al sito bersaglio, attraversare la membrana cellulare e essere rilasciate all'interno della cellula.
Le nanoparticelle lipidiche (LNPs) sono il miglior sistema di recapito disponibile, con vantaggi in termini di incapsulamento, espressione in vivo e sicurezza in vivo rispetto ad altri sistemi di recapito. Le LNPs con frammenti di acido nucleico vengono facilmente inglobate dalle cellule e formano corpi intracellulari. Una volta entrati nella cellula, l'ambiente acido del corpo intracellulare protona e carica positivamente la testa del lipide ionizzato, fondendosi quindi con la membrana interna del corpo intracellulare e rilasciando l'acido nucleico bersaglio all'interno della cellula per agire.
Il servizio circRNA di Yaohai Bio-Pharma continua a migliorare e può fornire il servizio di incapsulazione circRNA-LNP per ottimizzare i parametri critici del processo e migliorare la coerenza e la riproducibilità della produzione di farmaci circRNA.
Processo | Dettagli del servizio | Periodo di Consegna (giorni) | Consegne |
incapsulazione circRNA-LNP | Pretreatment del Materiale e del Liquido | 2 | prodotto farmaceutico circRNA-LNP (DP) |
Mescolamento con Dispositivo Microfluico | |||
Filtrazione a Flusso Tangenziale | 1 | ||
Filtrazione sterilizzante | |||
controllo della qualità di circRNA-LNP | Efficienza di incapsulamento | 1 | Rapporto di prova |
Dimensione delle particelle e indice di polidispersione | |||
Potenziale Zeta |
Sintesi rapida, alta efficienza R&D e soluzioni pre-ottimizzate;
Il rapporto di incapsulamento può raggiungere più dell'90%;
La dimensione delle nanoparticelle lipidiche può essere controllata cambiando il tasso e il rapporto di iniezione del fluido;
i prodotti circRNA-LNP vengono validati tramite espressione cellulare in vitro e possono esprimere la proteina target in modo efficiente.
Vengono preparati campioni di circRNA LNP-eGFP e diverse dosi di essi (1ug, 2ug e 4ug) vengono trasferite direttamente nelle cellule 293T per verificare se riescono a esprimere la proteina target. Dopo 48 ore dal trasferimento, è possibile osservare un segnale fluorescente chiaro e c'è un effetto di escalation della dose sull'intensità della fluorescenza.
Il Lipo-circ_eGFP, composto da liposomi e circRNA eGFP non incapsulato, viene utilizzato come controllo.