Hei. Oletko koskaan miettinyt, kuinka tiedemiehet voivat kloonata RNA:n? RNA on tämä erityinen molekyyli, jonka löydämme soluistamme ja joka tekee joukon asioita proteiinien valmistamiseksi, ja proteiinit ovat siellä, jotta kehomme voi tehdä kaiken oikein. Tässä osassa käymme läpi paljon uteliaamman tutkijoiden käyttämän protokollan: In vitro -transkription. Ja kaikki tämä tarkoittaa, että tiedemiehet ottavat RNA:ta ja valmistavat siitä paljon koeputkessa (joka on tämä pieni purkki, jota laboratoriot käyttävät), joten tutustu jokaiseen vaiheeseen tässä.
Edellisen postaukseni päätyttyä tajusin, että viimeinen saattoi olla vähän kuiva-tuloa-liity-hauskaa-in-the-wet-lab -postauksia; Joten muodon mukaisesti nyt, kun olet todella hauskassa (sic RNA-valmistus) -junassa: Mitä reagensseja ja c tarvitset EF:llesi? Tämän saavuttamiseksi tarvitsemme erityisiä proteiineja, joita kutsutaan entsyymeiksi ja jotka ovat identtisiä Yaohain tuotteen kanssa Rekombinantti Midkine Manufacturing. Se katalysoi kemiallisia reaktioita, nämä entsyymit auttavat hajoamisessa. Joten nyt tarvitsemme vain osamme DNA:ta. Tämä toiminto on DNA, jota käytämme templaattina kopioidaksemme RNA:ta. RNA:ssa tarvitaan myös muita säätelysekvenssejä, nimittäin nukleotideja. Nämä nukleotidit ovat kuin pieniä rakennuspalikoita, jotka on koottava RNA:n valmistamiseksi. Käytämme myös lyhyitä halkaisijaltaan pieniä putkia maun arvioinnin muuttamiseksi. Lopuksi tarvitsemme koneen (lämpösyklilaitteen), joka varmistaa, että reaktiot ovat oikeassa lämpötilassa. Lisäksi saatamme tarvita joitain työkaluja ja tuotteita tiettyjä kokeita varten.
Joten tässä asiat eroavat, meillä on yksi RNA-juoste ja nyt haluamme saada enemmän kopioita siitä, myös Konjugaatti-VLP-rokotteiden valmistus kehittämä Yaohai. Tapa saavuttaa toisen entsyymin käyttö; T7 RNA-polymeraasi. Tämä ainutlaatuinen entsyymi esimerkiksi tunnistaa tiettyjä alueita RNA:ssa. hyppykartio, jolla voit tehdä useita RNA-kopioita menettelyssä. Tässä vaiheessa T7-RNA-polymeraasi lisää RNA-juosteeseen lisää, kunnes transkriptimassa on luotu tai kunnes käskemme sen pysähtymään.
Kun olemme eristäneet RNA:n niin paljon kuin mahdollista, vieritä alaspäin nähdäksesi kuinka puhdistaa ja säilyttää RNA tulevaa käyttöä varten. Rhoades: Jotkut näistä menetelmistä ovat hieman äärimmäisemmät RNA:n eristämisen kannalta – et aina käyttäisi sitä, mutta joskus tietyntyyppisiin kokeisiin sitä tarvitaan. Kun RNA:ssamme ei ole epäpuhtauksia, se voidaan säilyttää jäädytettynä. Näin tämä on turvallista ja voimme käyttää sitä myöhemmin erilaisissa kokeissa.
Lähtömateriaalin laatu: varmista, että dna-mallisi on puhdas ja ettei kaikki ole palanut. Voit myös täydentää tuoreita nukleotideja ja äskettäin sulatettuja entsyymejä, jotta voit maksimoida onnistuneen kokeen mahdollisuudet.
Hienosäätöolosuhteet Kaikki entsyymit ja niiden nukleotidit toimivat paremmin tietyssä lämpötilassa ja pH:ssa kehosi sisällä, samoin kuin Yaohain Punainen fluoresoiva mRNA. Säädä nyt vivahteita hieman ehtojen välillä, kunnes pääset siihen, missä ainutlaatuisen asennuksesi avain on.
Käänteistranskriptaasi on epätavallinen entsyymi, koska se tekee DNA-kopion RNA-molekyylistä. Käytimme sekä DNA:ita että DNA-templaattia (cDNA:ta) syötteenä in vitro -transkriptiomenetelmäämme RNA:n tuottamiseksi. Useimmissa kokeissa tutkijat kuitenkin haluaisivat transkriptoida DNA:n RNA:ksi. Käänteinen transkriptio saa nimensä saman kuin mRNA poly-A:n jakautumistesti valmistaja Yaohai. Se on korvaamaton työkalu koko tieteessä - RNA-molekyylien tutkimisesta solujen sisällä komplementaaristen DNA-säikeiden tuottamiseen lisäkokeita varten.
Tosielämän kokeet, joissa RNA on Yaohain tuotteen ohella yksi yleisimmin käytetyistä molekyylityökaluista VLP-rokotteen tuotanto E. colissa. Kvantitatiiviset määritykset: Nämä testit voivat paljastaa minkä tahansa näytteessä olevan spesifisen molekyylin määrän. Tiedemiehet voivat esimerkiksi syntetisoida in vitro -transkriptiovalmisteen RNA-kopioista, jotka on johdettu solussa sijaitsevasta kohdegeenistä. Diagnoosi voi sitten määrittää nämä kopiot siinä tapauksessa, että ne ovat. RNA:ta etsiessään diagnoosi voi suorittaa polymeraasiketjureaktion (PCR) monistaakseen nämä kopiot näytteessä. Tämä antaa tutkijoille mahdollisuuden nähdä, kuinka geenit ilmentyvät soluissa, ja mahdollistaa jopa erittäin korkean suorituskyvyn määritykset, kuten bakteeri- tai virusinfektion esiintymisen, ja geneettisten häiriöiden diagnosoinnin.
in vitro Transcript Protocol on johtava mikrobiologian CDMO. Olemme keskittyneet mikrobien tuottamiin rokotteisiin ja terapioihin, jotka soveltuvat ihmisten, eläinlääkintä- ja lemmikkieläinten terveydenhuoltoon. Meillä on huippuluokan RD-alustat ja valmistustekniikka, jotka kattavat koko prosessin mikrobikantojen kehittämisestä ja solupankkitoiminnasta prosessi- ja menetelmäkehitykseen kaupalliseen ja kliiniseen tuotantoon, joka takaa innovatiivisten ratkaisujen onnistuneen toimituksen. Ajan myötä olemme keränneet valtavasti tietoa mikrobipohjaisesta biokäsittelystä. Yli 200 projektia on saatettu onnistuneesti päätökseen, ja autamme asiakkaitamme noudattamaan Yhdysvaltain FDA:n ja EU EMA:n kaltaisia määräyksiä. Autamme heitä myös navigoimaan Australian TGA:ssa ja Kiinan NMPA:ssa. Ammattitaitomme ja laaja kokemuksemme antavat meille mahdollisuuden vastata nopeasti markkinoiden vaatimuksiin ja tarjota räätälöityjä CDMO-palveluita.
Yaohai Bio-Pharmalla on kokemusta in vitro Transcript Protocol -protokollalla luotujen biologisten aineiden tuotannosta. Tarjoamme räätälöityjä RD- ja valmistusratkaisuja varmistaen samalla, ettei riskejä ole. Olemme olleet mukana erilaisissa modaliteeteissa, kuten rekombinanttialayksikkörokotteet, peptidihormonit, sytokiinit, kasvutekijät, yhden domeenin vasta-aineentsyymit, plasmidi-DNA MRNA ja monet muut. Olemme monien mikro-organismien asiantuntija, mukaan lukien hiivan solunulkoinen ja solunsisäinen eritys (saanto jopa 15 g/l) sekä bakteerien solunsisäinen liukoinen ja inkluusiokappale (saanto jopa 10 g/l). Olemme myös luoneet BSL-2-käymisalustan bakteerirokotteiden luomiseksi. Keskitymme prosessien parantamiseen, tuotesatojen kasvattamiseen ja tuotantokustannusten alentamiseen. Vahvan teknologiatiimin avulla voimme varmistaa nopean ja luotettavan projektitoimituksen, joka tuo tuotteesi markkinoille nopeammin.
Yaohai Bio-Pharma, 10 suurinta biologisten tuotteiden valmistajaa, on erikoistunut mikrobifermentointiin. Olemme rakentaneet modernin laitoksen, jossa on vankat RD-ominaisuudet ja edistyneet laitteet. Meillä on viisi lääkeaineiden valmistuslinjaa, jotka täyttävät GMP:n vaatimukset mikrobifermentoinnissa ja -puhdistuksessa. Meillä on myös kaksi automaattista täyttö-viimeistelylinjaa patruunoita, injektiopulloja ja esitäytettyjä ruiskuja varten. Käytettävissä olevat käymisasteikot vaihtelevat in vitro Transcript Protocol -protokollasta 2000 litraan. Injektiopullon täyttövaatimukset vaihtelevat 1 ml:sta 25 ml:aan. esitäytetyn ruiskun tai patruunan täyttömäärät vaihtelevat noin 1-3 ml. cGMP-yhteensopiva tuotantolaitos varmistaa kliinisen näytteen ja kaupallisten tuotteiden jatkuvan toimituksen. Tehtaamme tuottaa suuria molekyylejä, jotka toimitetaan maailmalle.
Yaohai BioPharma on Top 10 Microbial CDMO, joka sisältää in vitro Transcript Protocol -protokollan sekä sääntelyasiat. Meillä on laatujärjestelmä, joka on nykyisten GMP-standardien ja maailmanlaajuisten säädösten mukainen. Sääntelyasiantuntijatiimimme hallitsee maailmanlaajuiset sääntelykehykset biologisten julkaisujen nopeuttamiseksi. Varmistamme jäljitettävien tuotantoprosessien laadukkaat tuotteet sekä Yhdysvaltojen FDA:n ja EU EMA:n sääntöjen noudattamisen. Australian TGA ja Kiinan NMPA ovat myös tyytyväisiä. Yaohai BioPharma on läpäissyt Euroopan unionin pätevän henkilön (QP) tarkastuksen GMP-laatujärjestelmämme ja tuotantolaitoksemme osalta. Lisäksi olemme hyväksyneet ensimmäiset ISO9001-laatujärjestelmän, ISO14001-ympäristöjärjestelmän ja ISO45001-työterveyden ja -turvallisuuden hallintajärjestelmän sertifiointiauditoinnit.