У процесі підготовки мРНК транскрипції in vitro (IVT) потрібна лінеаризована плазмідна ДНК як матриця транскрипції для IVT за допомогою РНК-полімерази T7. Високоякісна плазмідна ДНК має вирішальне значення для транскрипції in vitro.
Базуючись на зрілій платформі підготовки плазмід, Yaohai Bio-Pharma може запропонувати послугу підготовки лінеаризованої плазмідної ДНК високої чистоти та високого стандарту для досягнення ефективної транскрипції IVT.
Деталі послуг
| Процес | Додаткова послуга | Сервісні деталі | Період доставки (робочий день) |
| Приготування кільцевої плазміди | Синтез генів | Генний синтез (сторонній) | 7-10 |
| Плазмідна ампліфікація | Плазмідна ампліфікація | 2 |
| Екстракція плазміди |
| Лінеаризований препарат плазміди | Лінеаризація та очищення плазмід | Лінеаризація плазмід | 1 |
| Лінеаризаційне очищення ДНК |
| Контроль якості плазмідної ДНК | Чистота концентрації | Ультрафіолетова (УФ) спектрофотометрія | 1-2 |
| Конформація плазміди | Електрофорез у агарозному гелі (AGE) |
| Капілярний електрофорез (КЕ) - необов'язково |
| Ідентифікація плазміди | Ідентифікація ферменту рестрикції/ AGE |
Наші особливості
Гнучкий вибір методів лінеаризації
- Висока швидкість відновлення
Оптимізація методів вилучення та очищення ДНК для досягнення високих показників відновлення.
Суворі стандарти контролю процесу з коефіцієнтом суперспіральної конформації зразків плазмід для досліджень понад 80%.
Високий стандарт і висока ефективність підготовки плазмід і послуги контролю якості для задоволення експериментальних потреб.
Вивчення проблеми
Взявши як приклад продукт мРНК_люциферази з каталогу Yaohai Bio-Pharma, зразок плазміди шаблону транскрипції (дослідницького класу) має суперспіральне співвідношення понад 90%, коефіцієнт лінеаризації, близький до 100%, і подальше співвідношення транскрипції до 1:200 ( лінеаризована плазмідна ДНК:мРНК).
МРНК_люцифераза, отримана шляхом приготування лінеаризованої плазміди як матриці, трансфікується в клітини 293T, і активність реакції фермент-субстрат оцінюється через 24 години після трансфекції.
Можна виявити очевидний сильний сигнал активності люциферази, тобто білок люциферази експресується ефективно, що свідчить про те, що чистота матриці транскрипції може повністю задовольнити вимогу високоякісного препарату мРНК.
Аналіз співвідношення суперскручених плазмід
Перевірка експресії мРНК люциферази in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
