Відповідно до центральної догми, інформаційна РНК (мРНК) є містком для передачі генетичного матеріалу від ДНК до білків.
мРНК відіграє біологічну роль, кодуючи білки in vivo, а зріла мРНК в еукаріотичних організмах складається з п’яти компонентів: 5' Cap (структура кепки), 5' UTR (некодуюча область), ORF (відкрита рамка зчитування), 3' UTR , і 3' polyA хвіст (поліаденілатний хвіст).
Процес | Додаткова послуга | Сервісні деталі | Період доставки (день) |
Дизайн та оптимізація послідовності мРНК | Проектування та оптимізація послідовностей кодування | Вирівнювання послідовності CDS Оптимізація кодонів CDS | 1 |
Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей | Проектування та оптимізація послідовності 5' UTR Проектування та оптимізація послідовності 3' UTR проектування й оптимізація послідовності polyA | 1-2 |
5' UTR/3' UTR |
|
3' PolyA хвіст |
|
Компоненти мРНК | Біологічні функції | Стратегії оптимізації |
5' Cap | Захист мРНК від деградації екзонуклеазами та діє спільно з хвостом polyA на 3'-кінці, білком, що зв’язує polyA, і білком фактора ініціації трансляції, щоб ініціювати трансляцію білка. | Природна структура Cap1 уникає рецепторів розпізнавання образів і, таким чином, знижує природну імунну відповідь, чого можна досягти за допомогою одноетапного котранскрипційного блокування або двоетапного ферментативного блокування [докладнішу інформацію див. у ферментативному блокуванні мРНК і котранскрипційному блокуванні]. |
5' UTR | 5' UTR може розпізнаватися рибосомами, регулювати трансляцію мРНК і впливати на стабільність мРНК. | Містять послідовності Козака без дуже стабільної вторинної структури. Для мРНК транскрипції in vitro (IVT), таких як α-глобін і β-глобін, перевагу надають природним UTR високоекспресованих генів. |
CDS | Ділянки, що кодують білки, і послідовності, що кодують антигени, антитіла або інші функціональні білки. | Оптимізація кодонів підвищує рівень трансляції, зазначаючи, що певні неоптимальні кодони можуть відігравати певну роль у згортанні білка. |
3' UTR | Регулюють трансляцію та стабільність мРНК. | Для мРНК IVT, таких як α-глобін і β-глобін, переважні природні UTR високоекспресованих генів. |
3' polyA хвіст | Регулюють експресію білка та захищають структуру кришки від деградації. | Потрібна адекватна довжина (100-150 bp); кодування хвоста polyA на плазміді матриці транскрипції забезпечує більш визначену довжину хвоста polyA. |
Численні джерела високо виражених природних і модифікованих бібліотек UTR; зріла стратегія модифікації UTR;
Співпрацюйте з командою професійних алгоритмів AI, щоб завершити оптимізацію кодонів.
Додайте послідовності polyA відповідно до шаблонів ДНК, щоб точніше контролювати довжину мРНК.
Досягти ефективної експресії мРНК з низькою імуногенністю.
Дизайн послідовності подвійної репортерної мРНК: мРНК mCherry-eGFP
Сервіс мРНК компанії Yaohai Bio-Pharma продовжує вдосконалюватись шляхом розробки та оптимізації тандемної послідовності подвійного репортерного гена, що забезпечує спільну експресію подвійних генів.
Використовуючи звичайний трансфекційний реагент, мРНК подвійної генної тандемної послідовності mCherry-eGFP трансфікується в клітини 293T, і два флуоресцентні сигнали mCherry (червоний) і посилений зелений флуоресцентний білок (eGFP) виявляються з одночасною експресією через 48 годин, і складені графік виділено жовтим кольором.
Експресія мРНК mCherry-eGFP в клітині 293T