Порівняно з двоетапним ферментативним кепуванням одноетапний метод котранскрипційного кепування може значно зменшити перебіг процесу. Метод орієнтований на результат і передбачає додавання кеп-аналогів до реакції транскрипції in vitro (IVT). Кеп-аналоги можна вводити на початку транскрипції, а мРНК з кеп-структурою можна отримати після завершення транскрипції. Сучасні аналоги кепа третього покоління можуть уникнути зворотного кепінгу та безпосередньо додати структуру Cap 1 до продукту транскрипції.
З міркувань імуногенності та ефективності трансляції мРНК in vivo процес IVT часто використовує певні типи модифікованих NTP, а поширеними модифікованими нуклеотидами є псевдоуридин (Ψ), N1-метил-псевдоурі-дин (N1Ψ) і 5-метилцитозин (5mC) .
Малюнок: Діаграма реакції котранскрипції та кепування мРНК
Сервісні деталі
Обслуговування | Сервісні деталі | Період доставки (робочий день) |
Котранскрипційне кепування | Відповідь на транскрипцію in vitro (аналог Clean Cap) | 1-2 |
| Модифікації нуклеотидів (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Видалення шаблону ДНК (DNase I) |
Оптимізація стану IVT - опціонально | Проектування та оптимізація компонентів реакції | 3-7 |
Наші особливості
- Різноманітні стратегії модифікації нуклеотидів
Кілька додаткових стратегій модифікації нуклеотидів можуть покращити експресію білка.
- Оптимізована система реагування
Досягніть високого коефіцієнта транскрипції та високої ефективності обмеження.
- Стабільний процес укупорки
Досягніть рівня обмеження понад 95%.
Ефективно запобігайте деградації мРНК шляхом суворого контролю РНКази в експериментальному середовищі та витратних матеріалах.
Вивчення проблеми
Компанія Yaohai Bio-Pharma розробила зрілу платформу процесу котранскрипційного кепування, використовуючи чисті кеп-аналоги для безпосереднього додавання структури Cap1, уникаючи зворотного кеппування. Після стандартизованої попередньої обробки зразка та виявлення капілярним електрофорезом (CE) швидкість блокування мРНК посиленого зеленого флуоресцентного білка (eGFP) може досягати понад 95%.
Ефективність блокування мРНК eGFP понад 95%
МРНК eGFP і мРНК mCherry, отримані за допомогою котранскрипційного кепування, трансфікуються в клітини 293T відповідно, і через 48 годин спостерігається сильний флуоресцентний сигнал, що свідчить про те, що мРНК ефективно експресується в клітинах 293T.
Експресія мРНК eGFP і мРНК mCherry в клітині 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
