Основою інкапсуляції є проектування та розробка системи доставки. Добре розроблена система доставки дозволяє молекулам circRNA проникати в організм без руйнування ферментами РНК, а потім ефективно доставлятися до цільового місця, перетинати клітинну мембрану та вивільнятися внутрішньоклітинно.
Наночастинки ліпідів (LNP) є найкращою доступною системою доставки з перевагами в інкапсуляції, експресії in vivo та безпечності in vivo порівняно з іншими системами доставки. ЛНП з фрагментами нуклеїнових кислот легко заковтуються в клітини і утворюють внутрішньоклітинні тіла. Після проникнення в клітину кисле середовище внутрішньоклітинного тіла протонує і позитивно заряджає головку іонізованого ліпіду, таким чином зливаючись із внутрішньою мембраною внутрішньоклітинного тіла та вивільняючи цільову нуклеїнову кислоту в клітину для дії.
Послуга circRNA Yaohai Bio-Pharma продовжує вдосконалюватись і може надавати послугу інкапсуляції circRNA-LNP для оптимізації відповідних критичних параметрів процесу та покращення узгодженості та відтворюваності виробництва ліків circRNA.
Процес | Сервісні деталі | Період доставки (день) | Очікувані результати |
інкапсуляція circRNA-LNP | Попередня обробка матеріалу та рідини | 2 | circRNA-LNP лікарський продукт (DP) |
Мікрофлюїдний пристрій для змішування | |||
Фільтрація тангенціального потоку | 1 | ||
Стерилізуюча фільтрація | |||
контроль якості circRNA-LNP | Ефективність інкапсуляції | 1 | Протокол випробування |
Розмір частинок та індекс полідисперсності | |||
Дзета потенціал |
Швидкий синтез, висока ефективність досліджень і розробок і попередньо оптимізовані рішення;
Коефіцієнт інкапсуляції може досягати більше 90%;
Розмір ліпідних наночастинок можна контролювати, змінюючи швидкість і співвідношення рідини;
Продукти circRNA-LNP підтверджені клітинною експресією in vitro та можуть ефективно експресувати цільовий білок.
Готують зразки circRNA LNP-eGFP і їх різні дози (1 мкг, 2 мкг і 4 мкг) безпосередньо трансфікують у клітини 293T, щоб перевірити, чи можуть вони експресувати цільовий білок. Через 48 годин після трансфекції можна спостерігати чіткий флуоресцентний сигнал, і спостерігається ефект ескалації дози інтенсивності флуоресценції.
Lipo-circ_eGFP, що складається з ліпосоми та неінкапсульованої eGFP circRNA, береться як контроль.