Що стосується масового виробництва мРНК, транскрипція in vitro (IVT) є більш ефективним і зрілим методом. Реакція IVT приймає лінеаризовану плазмідну ДНК, що містить промотор Т7, як матрицю, і мРНК синтезується з нуклеозидтрифосфатами (NTP) як субстратами в присутності РНК-полімерази Т7.
Модифікація нуклеотидів є проривом у дослідженні мРНК, коли немодифіковані молекули мРНК розпізнаються внутрішньоклітинними РНК-сенсорами для активації вродженого імунітету. З огляду на імуногенність мРНК in vivo та ефективність трансляції, процес IVT зазвичай використовує певні типи модифікованих NTP, а поширеними модифікованими нуклеотидами є псевдоуридин (Ψ), N1-метил-псевдоуридин (N1Ψ) і 5-метилцитозин (5mC).
Процес транскрипції мРНК in vitro
Діаграма реакції транскрипції in vitro (IVT).
Деталі послуг
Додаткова послуга | Сервісні деталі | Період доставки (робочий день) |
Транскрипція in vitro (IVT) | IVT, транскрипція in vitro | 1 |
| Модифікації нуклеотидів (Ψ/N1Ψ/5mC тощо) |
| Видалення шаблону ДНК (DNase I) |
Оптимізація стану IVT - опціонально | Проектування та оптимізація компонентів реакції IVT | 2-5 |
Наші особливості
- Різноманітні стратегії модифікації нуклеотидів
Покращує стабільність мРНК і експресію білка in vivo.
- Ретельний дизайн і оптимізація тестів
Можна отримати фрагмент мРНК розміром до 10 кб.
Завдяки оптимізації умов реакції IVT швидкість транскрипції досягає 1:200.
Суворий контроль РНКази за допомогою експериментального середовища та витратних матеріалів може ефективно запобігти деградації мРНК.
Вивчення проблеми
Сучасна реакційна система IVT приблизно оптимізована для синтетичних систем довжиною близько 100 нт, а не для мРНК довільної довжини. Чим довша послідовність мРНК, тим складніше її транскрибувати і тим більше вона схильна до деградації.
Щоб підготувати індивідуальні послідовності мРНК довжиною близько 10 кб, Yaohai Bio-Pharma успішно підготувала високоякісні зразки з високим співвідношенням транскрипції 1:135 і отримала 135 мкг початково очищених продуктів мРНК після 1 мкг лінеаризованої плазміди. був транскрибований in vitro шляхом ретельного експериментального дизайну, постійної оптимізації умов реакції та суворого контролю РНКази.
Ідентифікація мРНК (електрофорез у агарозному гелі)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
