всі категорії
ENEN
Транскрипція та циркуляція in vitro

Транскрипція та циркуляція in vitro

Головна >  IVT РНК  >  Індивідуальний синтез РНК  >  Спеціальний синтез circRNA  >  Транскрипція та циркуляція in vitro

IVT РНК

Транскрипція та циркуляція in vitro

Щодо серійного приготування попередників РНК, широко використовуваним методом є транскрипція in vitro (IVT). Реакція IVT використовує лінеаризовану плазмідну ДНК, що містить промотор Т7, як матрицю, і синтезує попередник РНК з нуклеозидтрифосфатами (NTP) як субстрат у присутності РНК-полімерази Т7.

Методи циклізації in vitro включають хімічне лігування, ферментативне лігування та метод переставленого інтрон-екзону (PIE). Хімічне лігування та ферментативне лігування придатні для циклізації коротших РНК. Коли розмір фрагмента перевищує 100 нт, швидкість циклізації значно зменшується. Навпаки, нуклеазний метод, заснований на системі PIE, може досягти циклізації послідовностей 8 кб.

Під час каталізу гуанозинтрифосфату (GTP) структура PIE зазнає циклізації позаінтронних послідовностей. У поєднанні з розумною стратегією збільшення швидкості циклізації Yaohai Bio-Pharma може досягти циклізації послідовностей до 4 кб з ефективністю циклізації понад 80%.

невизначених

Реакція циклізації РНК in vitro протікає наступним чином:

Попередник РНК синтезується шляхом транскрипції in vitro, а компонент PIE завершує самосплайсинг під дією каталізу GTP з утворенням circRNA.

невизначених

Деталі послуг
ПроцесСервісні деталіПеріод доставки (робочий день)
Транскрипція та циркуляція in vitroПідтвердження системи реакції1-2
Реакції транскрипції та циклізації in vitro
Розщеплення РНКазою R
Оптимізація реакціїСклад реакції, оптимізація часу2-5
Наші особливості
    • Ретельний дизайн тестів і оптимізація

Можна досягти циклізації РНК до 4 кб.

    • Висока ефективність циклізації

Швидкість циклізації понад 80% може бути досягнута за допомогою раціональної стратегії оптимізації послідовності.

    • Суворий контроль РНКази

Завдяки суворому контролю РНКаз в експериментальному середовищі та витратних матеріалах ефективно запобігається деградації РНК.

Вивчення проблеми

Циклізація in vitro та збагачення circRNA

Базуючись на системі PIE, Yaohai Bio-Pharma оптимізувала послідовність circRNA зі швидкістю циклізації понад 80% за допомогою електрофорезу в агарозному гелі (AGE). Використовуючи РНКазу R для збагачення circRNA, результати електрофорезу в E-gel показують, що лінійний попередник РНК перетравлюється, і після подальшого очищення більшу частину розрізаної circRNA можна видалити. Розчин для очищення власноруч розроблено компанією Yaohai Bio-Pharma.

невизначених

Циркуляція in vitro та збагачення circRNA

Отримайте безкоштовне котирування

Зв'яжіться з нами!