Yaohai Bio-Pharma готує circRNA на основі системи PIE (вирівнювання екзонів та інтронів), яка спирається на функцію самосплайсингу інтронів типу I для досягнення циклізації РНК. Структура PIE розроблена з використанням гена T4 td або рибного гена-попередника тРНК і виглядає наступним чином:
Інтрон РНК і фрагмент підтримуючого екзону розділені на дві частини (5'-кінцева і 3'-кінцева), де 5'-кінцева послідовність переноситься в хвіст цільової послідовності, 3'-кінцева послідовність вставляється в передню частину цільова послідовність, а послідовність цільового гена вставляється посередині.
Під час каталізу GTP структура PIE призводить до циклізації послідовностей, відмінних від інтронів. У поєднанні з розумною стратегією підвищення швидкості циклізації Yaohai Bio-Pharma може досягти циклізації послідовностей розміром до 4 кб зі швидкістю циклізації понад 80%.
Рисунок 1. Циркуляція circRNA in vitro на основі системи PIE
Деталі послуг
| Процес | Додаткова послуга | Сервісні деталі | Термін доставки (робочий день) |
| проектування та оптимізація послідовності circRNA | Проектування та оптимізація послідовностей кодування | Вирівнювання послідовності CDS Оптимізація кодонів CDS | 1 |
| Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей | Дизайн та оптимізація послідовності інтронів та екзонів Дизайн та оптимізація гомологічної послідовності плеча Розробка та оптимізація послідовності спейсерів | 1-2 |
Загальні стратегії для проектування послідовності мРНК
| Компоненти CircRNA | Біологічні функції | Стратегії оптимізації |
| Двокінцеві послідовності інтронів і екзонів | GTP-каталізований самосплайсинг інтронів для циклізації послідовностей поза інтроном. | Розроблено відповідно до гена T4 td або гена-попередника тРНК риб'ячого жиру. |
| Кодування | IRES | Внутрішній сайт розпізнавання рибосом, який регулює трансляцію circRNA. | Скринінг послідовностей внутрішнього сайту входу рибосоми (IRES) з різних вірусних джерел, наприклад джерел EMCV, CVB3. |
| CDS | Ділянки, що кодують білок, послідовності, що кодують антигени, антитіла або інші функціональні білки. | Оптимізація кодонів підвищує рівень трансляції; певні неоптимальні кодони можуть відігравати роль у згортанні білка. |
| Некодування | Некодуючі послідовності | Цільові мікроРНК або білки, щоб здійснювати регуляцію генів або білків. | Націлювання на специфічні сайти зв’язування мікроРНК або білків може повторювати послідовності сайту зв’язування. |
Наші особливості
- Оптимізована система циклізації PIE Поєднання з розумними стратегіями оптимізації для досягнення рівня циклізації понад 80%;
- Передова команда оптимізації CDS Співпраця з командою професійних алгоритмів AI для завершення оптимізації кодонів регіону CDS;
- Зрілу та ідеальну процесну circRNA можна досягти з високою ефективністю циклізації, високою стабільністю та високою ефективністю трансляції.
Вивчення проблеми
Компанія Yaohai Bio-Pharma випустила контрольний продукт — circRNA зеленого флуоресцентного білка (eGFP), який базується на системі PIE для досягнення циклізації РНК.
Використовуючи звичайний реагент для трансфекції, eGFP circRNA трансфікується в клітини 293T, і eGFP (зелений) флуоресцентний сигнал можна виявити через 24 години, який посилиться через 48 годин. Флуоресцентний сигнал все ще можна виявити на 7-й день і на 14-й день після трансфекція.
Перевірка експресії eGFP circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
