Для приготування CircRNA потрібна лінійна РНК як матеріал-попередник (попередник РНК) для циклізації, де попередник РНК зазвичай готується з використанням лінеаризованої плазмідної ДНК як матриці транскрипції та транскрибується in vitro за допомогою РНК-полімерази T7.
Високоякісна плазмідна ДНК необхідна для транскрипції in vitro (IVT). Базуючись на зрілій платформі підготовки плазмід, Yaohai Bio-Pharma може надати послуги високої чистоти та стандартної лінеаризованої плазмідної ДНК (пДНК) для забезпечення цілісності продуктів IVT.

Деталі послуг
Процес |
Додаткова послуга |
Сервісні деталі |
Період доставки (робочий день) |
Приготування кільцевої плазміди |
Синтез генів |
Генний синтез (сторонній) |
7-10 |
Плазмідна ампліфікація |
Плазмідна ампліфікація |
2 |
Екстракція плазміди |
Лінеаризований препарат плазміди |
Лінеаризація та очищення плазмід |
Лінеаризація плазмід |
1 |
Лінеаризаційне очищення ДНК |
Контроль якості плазмідної ДНК |
Чистота концентрації |
Ультрафіолетова (УФ) спектрофотометрія |
1-2 |
Конформація плазміди |
Електрофорез у агарозному гелі (AGE) |
Капілярний електрофорез (КЕ) - необов'язково |
Ідентифікація плазміди |
Ідентифікація ферменту рестрикції/ AGE |
Наші особливості
Гнучкий вибір методів лінеаризації
- Висока швидкість відновлення
Оптимізація методів вилучення та очищення ДНК для досягнення високих показників відновлення.
Суворі стандарти контролю процесу з коефіцієнтом суперспіральної конформації зразків плазмід для досліджень понад 80%.
Високий стандарт і висока ефективність підготовки плазмід і послуги контролю якості для задоволення експериментальних потреб.
Вивчення проблеми
Візьмемо як приклад продукт Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA, суперспіралізоване співвідношення зразків плазмід матриці транскрипції (дослідницький рівень) становить понад 70%, зі швидкістю лінеаризації, близькою до 100%.
mCherry circRNA готують з лінеаризованою плазмідою як матрицею та трансфікують у клітини 293T. Високий рівень експресії флуоресценції (червона флуоресценція) виявляється через 24 години після трансфекції, який посилюється через 48 годин і все ще може бути виявлений на 7-й день та 14-й день після трансфекції.
Білок mCherry стабільно та ефективно експресується, а чистота транскрипційного шаблону може задовольнити вимоги лікарського засобу circRNA (DP) високої якості.

Перевірка експресії in vitro circRNA mCherry