Підготовка CircRNA вимагає лінійної РНК як прематеріалу (RNA precursor) для циклізації, де РНК-прематеріал зазвичай підготовується за допомогою лінійної плазмідної ДНК як шаблона транскрипції та транскрибуються in vitro за допомогою полімерази T7 RNA.
Якісна плазмідна ДНК є необхідною для транскрипції in vitro (IVT). На основі досконалого сервісу підготовки плазмід, Yaohai Bio-Pharma може надати сервіс підготовки високочистої та стандартної лінійної плазмідної ДНК (pDNA), щоб забезпечити цілісність продуктів IVT.
Деталі послуг
| Процес |
Опціональні послуги |
Деталі послуги |
Термін доставки (робочий день) |
| Підготовка циркулярних плазмід |
Синтез генів |
Синтез гену (від третіх осіб) |
7-10 |
| Усилування плазміди |
Усилування плазміди |
2 |
| Екстракція плазміди |
| Підготовка лінійної плазміди |
Лінеаризація та очищення плазмідів |
Лініаризація плазміди |
1 |
| Очищення ДНК після лінійнування |
| Контроль якості ДНК плазміди |
Концентрація чистоти |
Ультрафіолетова (UV) спектрофотометрія |
1-2 |
| Конформація плазміди |
Електрофорез у агарозному гелі (AGE) |
| Капілярна електрофореза (CE) - опціонально |
| Ідентифікація плазмід |
Ідентифікація розщеплювальних ензимів / AGE |
Наші особливості
Гнучкий вибір методів лінеаризації
- Висока відновна здатність
Оптимізація методів витягування та очищення ДНК для досягнення високих показників відновлення.
Строгі стандарти контроля процесу, зі ступінню суперспіральної конформації плазмідних вибірок для досліджень більше 80%.
- Дорослий платформений процес
Високий стандарт та висока ефективність послуг підготовки плазмід та контролю якості для задовolenня експериментальних потреб.
Вивчення випадку
На прикладі продукту Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA, ступінь суперспіралізації транскрипційних шаблонних плазмідних вибірок (дослідницького розряду) складає більше 70%, з лінеаризацією майже 100%.
mCherry circRNA підготується за лінеаризованою плазмідою як шаблоном і трансфекціюється у клітини 293T. Після 24 годин трансфекції виявляється високий рівень експресії флуоресценції (червона флуоресценція), який збільшується через 48 годин і може виявлятися на 7-й та 14-й день після трансфекції.
білок mCherry стабільно та ефективно експресується, а чистота транскрипційного шаблону відповідає вимогам циркулярного РНК-лікарського продукту (DP) високої якості.
Перевірка експресії in vitro mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
