За центральною догмою, месенджерна РНК (mRNA) є мостом для передачі генетичного матеріалу від ДНК до білків.
mRNA виконує біологічну роль, кодуючи білки in vivo, і зріла mRNA у еукаріотних організмах складається з п'яти компонентів: 5' Cap (капова структура), 5' UTR (нерозкодована область), ORF (відкритий читальний фрейм), 3' UTR та 3' polyA хвіст (поліаденілатний хвіст).
Деталі послуг
| Процес |
Опціональні послуги |
Деталі послуги |
Термін доставки (днів) |
| проектування та оптимізація послідовності mRNA |
Проектування та оптимізація кодуючих послідовностей |
Вирівнювання послідовності CDS
Оптимізація кодонів CDS
|
1 |
| Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей |
проектування та оптимізація послідовності 5' UTR
проектування та оптимізація послідовності 3' UTR
проектування та оптимізація послідовності polyA
|
1-2 |
Виберіть
| 5’ UTR/3’ UTR |
- Природна UTR послідовність
- Мутантна/Інженерна UTR послідовність
|
| 3' ПоліА хвіст |
- 100A ~120A Хвіст (рекомендований)
- Сегментований поліА хвіст
- Інший змінений хвіст
|
Загальні стратегії проектування послідовності mRNA
| компоненти mRNA |
Біологічні функції |
Стратегії оптимізації |
| 5’ Кап |
Захищає mRNA від деградації екзонуклеазами та взаємодіє з поліA хвостом у 3' кінці, білком, що зв'язується з поліA, та фактором ініціації перекладу для початку перекладу білок. |
Натуральна структура Cap1 уникне рецепторів розпізнавання патернів, а отже зменшує природну імунну відповідь, яка може бути досягнута за допомогою одноетапного спільного капування або двохетапного ензиматичного капування [див. детально про ензиматичне капування mRNA та спільне капування]. |
| 5' НТР |
5' НТР може бути впізнано рибосомами, регулювати трансляцію мРНК і впливати на стабільність мРНК. |
Містять секвенції Козак без дуже стабільної вторинної структури. Природні НТР генів, які високо експресуються, перевага для транскрипції in vitro (IVT) мРНК, таких як α-глобін і β-глобін. |
| КДС |
Регіони кодування белка та кодуючі послідовності для антигенів, антитіл або інших функціональних белків. |
Оптимізація кодонів збільшує рівень трансляції, зауважуючи, що деякі неоптимальні кодони можуть грати роль у складанні белка. |
| 3' НТР |
Регулюють трансляцію мРНК і її стабільність. |
Природні НТР генів, які високо експресуються, перевага для мРНК IVT, таких як α-глобін і β-глобін. |
| 3' поліА хвіст |
Регулювати виразку протеїнів та захищати капову структуру від деградації. |
Необхідна достатня довжина (100-150 бп); кодування поліаденінового хвоста на плазмідному шаблоні транскрипції забезпечує більш визначену довжину поліаденінового хвоста. |
Наші особливості
Кілька джерел природних та модифікованих бібліотек UTR з високою експресією; стратегія зрілого модифікування UTR;
- Передовний командний оптимізаційний CDS
Співпрацювати із професійною командою алгоритмів ШИ, щоб завершити оптимізацію кодонів.
- Рівномірний розподіл поліаденінового хвоста
Додавати поліаденінові послідовності за шаблонами ДНК, щоб точніше контролювати довжину мРНК.
- Розмаїття комбінацій оптимізації
Досягти ефективної експресії мРНК з низькою імуногенністю.
Вивчення випадку
Проектування послідовності двостаткового mRNA: mCherry-eGFP mRNA
Сервіс mRNA від Yaohai Bio-Pharma постійно покращується завдяки проектуванню та оптимізації тандемної послідовності подвійного репортерного гена, яка забезпечує спільне вираження двох генів.
За допомогою традиційного трансфекційного агента тандемна послідовність подвійного гена mCherry-eGFP mRNA трансфікується у клітини 293T, і після 48 годин виявляються два флуоресцентні сигналу: mCherry (червоний) та збільшений зелений флуоресцентний протеїн (eGFP) з одночасним вираженням, а комбінований графік виділений жовтим кольором.
Вираження mRNA mCherry-eGFP у клітинах 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
