зачинення 5'-кінця є необхідною модифікацією mRNA. mRNA з каповими структурами, особливо Cap1 структурами, сприяють тому, що mRNA уникатиме вроджених імунних відгуків in vivo, що призводить до ефективного перекладу білків.
Ферментне зачинення (двокроковий метод) є традиційним способом зачинення mRNA, подібним до процесу зачинення у еукаріотичних організмах. Під дією серії ферментів, 7-метилгуанін (m7G) поєднується з 5'-кінцем mRNA через трифосфатну в'язку 5'-5' і піддається метилова модифікація, щоб утворити капову структуру Cap 1 (m7GpppN).
Діаграма формування природньої капової структури
Процес ферментного зачинення виглядає наступним чином:
Лінеаризована плазмідна ДНК використовується як шаблон для транскрипції in vitro (IVT) у наявності полімерази T7, і мРНК з каповою структурою на 5' кінці утворюється після однокрокової очищення за допомогою ензиму капування вакцинового віруса та 2'-O-метилтрансферази.
Деталі послуг
Опціональні послуги |
Деталі послуги |
Термін доставки (днів) |
ензимна закривання mRNA |
Ензимна реакція капування |
1 |
Оптимізація реакції капування - необов'язкова |
Проектування та оптимізація компонентів реакції |
3~7 |
Наші особливості
- Проектування та оптимізація компонента реакції капування
Компонент реакції капування оптимізований, і виробництво транскрипту мРНК значно збільшується.
- Верифікація експресії in vitro
МРНК з капою трансфекційована до клітин 293T, і можливо виявити експресію цільового белка.
За допомогою строгого контролю RNase в експериментальному середовищі та витратних матеріалах ефективно запобігається деградації mRNA.
Вивчення випадку
Платформа mRNA компанії Yaohai Bio-Pharma створила ідеальний процес капування.
Для mRNA eGFP, попередньої продукції за допомогою ензиматичного капування, через 24 години після трансфекції клітин 293T можна спостерігати сильний сигнал флуоресценції eGFP (зелена флуоресценція), який виявляється методом Western Blot (WB). Це свідчить про те, що цільовий протеїн — зміцнений зелений флуоресцентний протеїн (eGFP) — може бути ефективно виражений in vitro.
Вираз ензиматично капованого mRNA eGFP у клітинах 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
