У порівнянні з двокроковим ензиматичним закриванням, однокроковий метод спільного транскрипційного закривання може значно скоротити процес. Цей метод орієнтований на результат і передбачає додавання аналогів капсули до реакції транскрипції in vitro (IVT). Аналоги капсул можна вводити на початку транскрипції, а по завершенню транскрипції отримувати mRNA з капсованою структурою. Поточні третє покоління аналогів капсул можуть уникнути оберненого закривання та безпосередньо додати структуру Cap 1 до продукту транскрипції.
З огляду на імуногенність mRNA in vivo та ефективність перекладу, процес IVT часто використовує певні види модифікованих НТП, а поширені модифіковані нуклеотиди — це псевдouriidine (Ψ), N1-метил-псевдouriidine (N1Ψ) і 5-метилцитозин (5mC).
Рисунок: Схема ко-транскрипційної реакції мРНК та капування
Деталі послуги
Сервіс |
Деталі послуги |
Термін доставки (робочий день) |
Ко-транскрипційне капування |
Відповідь in vitro транскрипції (чистий аналог капа) |
1-2 |
| Модифікація нуклеотидів (Ψ/ N1Ψ/ 5mC) |
| Видалення шаблону DNA (DNase I) |
Оптимізація умов IVT - опціонально |
Проектування та оптимізація компонентів реакції |
3-7 |
Наші особливості
- Розмаїтні стратегії модифікації нуклеотидів
Кілька необов'язкових стратегій модифікації нуклеотидів можуть покращити вираження білка.
- Оптимізована реакційна система
Досягнення високого ступеня транскрипції та ефективності капування.
- Стабільний процес капування
Досягнення ступеня капування більше 95%.
Ефективно запобігає деградації mRNA шляхом суворого контролю RNази у експериментальному середовищі та використовуваних матеріалах.
Вивчення випадку
Yaohai Bio-Pharma створила досконалу платформу для капування під час транскрипції, використовуючи чисті аналоги капа для безпосереднього додавання структури Cap1, при цьому уникнувши зворотнього капування. Після стандартизованої попередньої обробки проб та детекції капілярною електрофорезою (CE), ступінь капування мРНК збільшеного зеленого флуоресцентного білка (eGFP) може досягати більше 95%.
ефективність капування мРНК eGFP більше 95%
РНК eGFP та РНК mCherry, підготовлені шляхом котранскрипційного капування, трансфекціюються в клітини 293T відповідно, і після 48 годин спостерігається сильний флуоресцентний сигнал, що свідчить про ефективне вираження РНК у клітинах 293T.
Вираження РНК eGFP та РНК mCherry в клітинах 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
