Наймовна синтеза saRNA
Саморепlicating mRNA (saRNA), також відомий як replicon RNA, кодує послідовності in vitro транскрипції (IVT) mRNA та вірусні гени реплікази, похідні від альфавірусів чи флавівірусів. Вірусні гени реплікази дозволяють саморепликацію mRNA, що призводить до збільшення експресії протеїну та мінімальної необхідної дози RNA у порівнянні з нерепlicating mRNA. Інший аспект полягає в тому, що saRNA - це відносно велика молекула (більше 14 кб).
Yaohai Bio-Pharma розробила набір технологій синтезу mRNA для виробництва ненадзвичайної mRNA та самонадзвичайної mRNA (1000 нт~14000 нт), таких як проектування та оптимізація послідовностей, ІВТ, очищення, ліофілізація та енкапсуляція у ліпідних наночастинках (LNP). Усі продукти випускаються за строгими стандартами контролю якості.
Рис.1 Структурні особливості IVT mRNA: Традиційна, Циркулярна та Самонадзвичайна mRNA.
Послідовністьові особливості самонадзвичайної mRNA
Самозбільшувальна РНК складається з чотирьох неструктурних білків (позначених як nsP1, nsP2, nsP3 і nsP4), які походять від альфавірусів, саме віруса венецуельської конної енцеfalіти (VEEV). Серед них nsP1 виявляє дві ензиматичні активності, а саме GTase і N7MTase, тоді як nsP2 має RTPase-активність, що є ключовою для формування структури Cap 0 під час капсування mRNA IVT. Крім того, nsP2 виступає як протеаза і геліказа, сприяючи складному процесуванню всього комплексу nsP. Точна функція nsP3 залишається невизначеною, однак вона взаємодіє з різноманітними белками господарської клітини, таким чином зменшуючи антивірусну відповідь господаря.
Регіон субгеномного промотора (SGP) альфавірусів розташований перед геном інтересу (GOI). Елемент SGP сприяє початку транскрипції GOI, обходячи читання послідовності, що кодує вірусні білки nsP.
Рис.2 Синтез та клітинні асайми eGFP saRNA платформи Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Настраювані розв'язки saRNA
Протокол синтезу saRNA схожий на mRNA: Спеціальний синтез mRNA
- Дизайн послідовності
- Підготовка плазмідного шаблону
- транскрипція in vitro (IVT)
- ензимна закривання mRNA
- ко-транскрипційна закривання mRNA
- очищення mRNA
- ліофілізація mRNA
- Енкапсуляція у ЛНП
- Аналіз та тестування
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
