Yaohai Bio-Pharma підготує circRNA на основі системи PIE (вирівнювання езонів та інтронів), яка залежить від функції самоперерізання типу I інтронів для досягнення циклізації RNA. Структура PIE проектується за допомогою гену T4 td або предшественника tRNA риби, а розташування таке:
РНК інтрон та підтримуючий езонний фрагмент поділяються на дві частини (5' термінал і 3' термінал), де послідовність 5' терміналу переноситься до хвоста цільової послідовності, послідовність 3' терміналу вставляється перед цільовою послідовністю, а цільова гена послідовність вставляється посередині.
Під каталізом GTP, структура PIE призводить до циклізації послідовностей, інших за інтрони. У kombінації з раціональною стратегією підвищення швидкості циклізації, Yaohai Bio-Pharma може досягти циклізації послідовностей до 4 кб зі швидкістю циклізації більше 80%.
Рисунок 1. Витрівна циркуляція circRNA на основі системи PIE
Деталі послуг
| Процес |
Опціональні послуги |
Деталі послуги |
Термін доставки (робочий день) |
| проектування та оптимізація послідовності circRNA |
Проектування та оптимізація кодуючих послідовностей |
Вирівнювання послідовності CDS
Оптимізація кодонів CDS
|
1 |
| Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей |
Проектування та оптимізація послідовностей інтронів та ексонів
Проектування та оптимізація гомологічної послідовності руки
Проектування та оптимізація послідовності спейсеру
|
1-2 |
Загальні стратегії проектування послідовності mRNA
| Компоненти CircRNA |
Біологічні функції |
Стратегії оптимізації |
| Двотермінальні інтронні та екзонні послідовності |
Самоперешкодження інтрону, катализоване GTP, для циклізації послідовностей поза інтроном. |
Спроектовано за геном T4 td або предшествуючим геном tRNA риб'ячого жиру. |
| Кодування |
IRES |
Внутрішній сайт розпізнавання рибосоми, що регулює переклад circRNA. |
Скрінінг секвенцій внутрішнього сайту входу рибосоми (IRES) з різних вірусних джерел, наприклад, EMCV, CVB3 джерела. |
| КДС |
Регіони кодування белків, секвенції, що кодують антигени, антитіла або інші функціональні белки. |
Оптимізація кодонів збільшує рівень трансляції; деякі неоптимальні кодони можуть грати роль у складанні белка. |
| Некодуючі |
Некодуючі секвенції |
Цільові мікRNA або белки для впливу на регуляцію гену або белка. |
Цільове визначення спеціфічних місць зв'язування для мікRNA або белків може повторювати секвенції місця зв'язування. |
Наші особливості
- Оптимізована система циклізації PIE за допомогою раціональних стратегій оптимізації для досягнення ступеня циклізації більше 80%;
- Співробітництво інноваційної команди оптимізації CDS з професійною командою алгоритмів штучного інтелекту для завершення оптимізації кодонів у регіоні CDS;
- Дорослий і досконалий процес circRNA можна досягти за допомогою високої ефективності циклізації, високої стійкості та високої ефективності трансляції.
Вивчення випадку
Yaohai Bio-Pharma запустила контрольний продукт — зелений флуоресцентний белок (eGFP) circRNA, який на основі системи PIE досягає циклізації РНК.
За допомогою конвенційного трансфекційного реагенту eGFP circRNA трансфікується у клітини 293T, і через 24 години можна виявити флуоресцентний сигнал eGFP (зелений), який після 48 годин буде покріпшуватися. Флуоресцентний сигнал все ще можна виявити на сьомий і чотирнадцятий день після трансфекції.
Валідація експресії in vitro для eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
