Zakrytie 5'-konca je podstatnou modifikáciou mRNA. mRNA so štruktúrami uzáveru, najmä štruktúrami Cap1, uľahčujú mRNA vyhýbať sa vrodeným imunitným reakciám in vivo, čo vedie k účinnej translácii proteínov.
Enzymatická čiapočka (dvojkroková metóda) je konvenčná metóda mRNA čiapočky, podobná procesu čiapočky v eukaryotických organizmoch. Pôsobením série enzýmov je 7-metylguanín (m7G) spojený s 5'-koncom mRNA prostredníctvom 5'-5' trifosfátovej väzby a podlieha metylačnej modifikácii za vzniku čiapočkovej štruktúry Cap 1 (m7GpppN).
Schéma tvorby prirodzenej čiapky
Prietok enzymatickej uzatváracej reakcie je nasledujúci:
Linearizovaná plazmidová DNA sa používa ako templát pre in vitro transkripciu (IVT) v prítomnosti T7 polymerázy a mRNA s 5' end-cap štruktúrou sa vytvorí po jednokrokovej purifikácii pomocou vaccinia capping enzýmu a 2'-O -metyltransferáza.
Podrobnosti o službách
Voliteľná služba |
Detaily služby |
Dodacia lehota (deň) |
mRNA enzymatické zakrytie |
Enzymatická uzatváracia reakcia |
1 |
Optimalizácia reakcie na obmedzenie - voliteľné |
Návrh a optimalizácia reakčných komponentov |
3 ~ 7 |
Čo robíme:
- Návrh a optimalizácia komponentu uzatváracej reakcie
Zložka krycej reakcie je optimalizovaná a produkcia transkriptu mRNA sa výrazne zvýši.
- Overenie expresie in vitro
Uzavretá mRNA sa transfekuje do buniek 293T a môže sa detegovať expresia cieľového proteínu.
Prostredníctvom prísnej kontroly experimentálneho prostredia a spotrebného materiálu RNaseson sa účinne predchádza degradácii mRNA.
Prípadová štúdia
Platforma mRNA spoločnosti Yaohai Bio-Pharma vytvorila dokonalý proces uzatváracej reakcie.
V prípade eGFP mRNA, predproduktu mRNA pripraveného enzymatickým cappingom, možno pozorovať eGFP fluorescenčný signál (zelená fluorescencia) na vysokej úrovni po transfekcii buniek 293T počas 24 hodín, čo sa deteguje pomocou Western Blot (WB), čo dokazuje, že zelený fluorescenčný proteín zosilnený cieľovým proteínom (eGFP) môže byť účinne exprimovaný in vitro.
Expresia enzymatickej eGFP mRNA s uzáverom v 293T bunke
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
