Význam testu účinnosti mRNA
S rýchlym vývojom mRNA vakcín a terapeutík je potrebný špecifický panel analytických metód na testovanie účinnosti (definujúce ich biologickú aktivitu), vrátane translačnej účinnosti mRNA. Tieto metódy sú typicky založené na bunkovej transfekcii a funkčných testoch cieľového proteínu.
Yaohai Bio-Pharma ponúka testy účinnosti na báze buniek pre liečivé látky mRNA alebo produkty LNP, vrátane bunkovej transfekcie (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, bunky Raw264.7 atď.) a testov ELISA alebo Western blotting (WB).
Regulačné požiadavky na testy účinnosti
Podľa regulačných úvah WHO: „Účinnosť každej šarže finálnej vakcíny by sa mala určiť pomocou vhodne kvantitatívnej a overenej funkčnej metódy (metód). Potenciálne testy účinnosti in vitro môžu zahŕňať transfekčné systémy založené na bunkách alebo bezbunkové testy. A USP odporučil „bunkový test“ na testovanie účinnosti mRNA, tj expresie cieľového proteínu.
Postup
Krok 1. Bunková transfekcia s mRNA alebo mRNA-LNP
Bunky sa kultivujú a transfekujú mRNA alebo mRNA-LNP. Podrobne, mRNA sa transfekuje po zmiešaní s transfekčným činidlom, zatiaľ čo mRNA-LNP sa priamo transfekuje do buniek. Po 24-48 hodinách vyčírejte supernatant obsahujúci exprimovaný proteín centrifugáciou.
Krok 2. Funkčné testy cieľového proteínu
Vykonajte testy ELISA alebo WB na posúdenie funkčnej väzby cieľových proteínov.
Prípadová štúdia
Bunkové testy účinnosti vzoriek mRNA
Yaohai-BioPharma vyvinula metódu testovania účinnosti mRNA na báze buniek, zahŕňajúcu bunkovú kultúru, bunkovú transfekciu a funkčné testy proteínov. Transfekovali sme eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferázovú mRNA, spike proteínovú mRNA do 293T buniek a detegovali sme cieľový proteín prostredníctvom fluorescencie, luminiscenčného alebo farebného signálu, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
