Príprava CircRNA vyžaduje lineárnu RNA ako prekurzorový materiál (prekurzor RNA) na cyklizáciu, pričom prekurzor RNA sa zvyčajne pripravuje pomocou linearizovanej plazmidovej DNA ako transkripčného templátu a transkribuje sa in vitro pomocou T7 RNA polymerázy.
Vysokokvalitná plazmidová DNA je nevyhnutná pre in vitro transkripciu (IVT). Na základe servisnej platformy pre prípravu zrelých plazmidov môže spoločnosť Yaohai Bio-Pharma poskytnúť službu prípravy vysoko čistej a štandardnej linearizovanej plazmidovej DNA (pDNA), aby sa zabezpečila integrita produktov IVT.
Podrobnosti o službách
| Proces | Voliteľná služba | Detaily služby | Dodacia lehota (pracovný deň) |
| Príprava kruhového plazmidu | Syntéza génov | Génová syntéza (tretej strany) | 7-10 |
| Plazmidová amplifikácia | Plazmidová amplifikácia | 2 |
| Extrakcia plazmidu |
| Linearizovaná príprava plazmidov | Linearizácia a čistenie plazmidu | Linearizácia plazmidu | 1 |
| Linearizácia Purifikácia DNA |
| Kontrola kvality plazmidovej DNA | Koncentračná čistota | Ultrafialová (UV) spektrofotometria | 1-2 |
| Plazmidová konformácia | Elektroforéza na agarózovom géli (AGE) |
| Kapilárna elektroforéza (CE) - voliteľná |
| Identifikácia plazmidu | Identifikácia reštrikčného enzýmu/ AGE |
Čo robíme:
- Plazmid šablóny voľného strihu
Flexibilný výber metód linearizácie
Optimalizácia metód extrakcie a purifikácie DNA na dosiahnutie vysokej miery výťažnosti.
Prísne štandardy riadenia procesov s mierou superhelikálnej konformácie vzoriek plazmidov pre výskum nad 80 %.
- Proces vyspelej platformy
Vysoko štandardná a vysoko účinná príprava plazmidov a služby kontroly kvality na splnenie experimentálnych potrieb.
Prípadová štúdia
Ak vezmeme ako príklad produkt mCherry circRNA od Yaohai Bio-Pharma, pomer nadzávitnicových vzoriek plazmidu transkripčného templátu (stupeň výskumu) je viac ako 70 %, s mierou linearizácie takmer 100 %.
mCherry circRNA sa pripraví s linearizovaným plazmidom ako templátom a transfekuje sa do 293T buniek. Vysoká úroveň expresie fluorescencie (červená fluorescencia) sa deteguje po 24 hodinách transfekcie, ktorá sa zosilní po 48 hodinách a stále ju možno detegovať na 7. deň a 14. deň po transfekcii.
Proteín mCherry je stabilne a účinne exprimovaný a čistota transkripčného templátu môže spĺňať požiadavku na liečivý produkt circRNA (DP) s vysokou kvalitou.
In vitro validácia expresie mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
