Podľa centrálneho dogmatu je pośliace RNA (mRNA) mostom pre prenos genetického materiálu z DNA do białok.
mRNA vykonáva biologickú funkciu kódovaním białok in vivo, a zrelá mRNA v eukaryotických organizmomach sa skladá z piatich komponentov: 5' Cap (kapová štruktúra), 5' UTR (nekódovacia oblasť), ORF (otvorená čítacia ramena), 3' UTR a 3' polyA chvost (polyadenylátový chvost).
Detaily služieb
| Proces |
Voliteľná služba |
Podrobnosti služby |
Dobový obdobie doručenia (Deň) |
| návrh a optimalizácia sekvencie mRNA |
Návrh a optimalizácia kódovacích sekvencií |
Zarovnanie CDS sekvencie
Optimalizácia CDS kodónov
|
1 |
| Návrh a optimalizácia nekódovacích postupností |
návrh a optimalizácia sekvencie 5' UTR
návrh a optimalizácia sekvencie 3' UTR
návrh a optimalizácia polyA sekvencie
|
1-2 |
Možnosti prispôsobiteľné
| 5’ UTR/3’ UTR |
- Prírodná UTR sekvenčná
- Mutantná/Stavbená UTR sekvenčná
|
| 3' PolyA chvost |
- 100A ~120A Chvost (doporučený)
- Segmentovaný polyA chvost
- Iný vlastný chvost
|
Bežné strategie na návrh postupu mRNA
| komponenty mRNA |
Biológicke funkcie |
Strategie optimalizácie |
| 5’ Cap |
Chráni mRNA pred degradáciou exonukleázami a spolupracuje s polyA chvostom na 3' konci, polyA vázovacím proteínom a proteínom iniciácie prekladu na zahajanie prekladu proteínu. |
Prirodzená Cap1 štruktúra vyhýja detekcii receptorami pre vzory a tak zníži prirodzenú imunológicku odpoveď, ktorú je možné dosiahnuť jednopriestupným kotovaním po transkripcii alebo dvojpriestupným enzymatickým kotovaním [viď podrobnosti v časti mRNA enzymatické kotovanie a kotovanie počas transkripcie]. |
| 5' UTR |
5' UTR môže byť uznaný ribosómami, regulovať preklad mRNA a ovplyvňovať stabilitu mRNA. |
Obsahujú Kozakovu sekvenciu bez veľmi stabilnej sekundárnej štruktúry. Prirodzené UTR vysoce exprimovaných génov sú preferované pre in vitro transkripciu (IVT) mRNA, ako napríklad α-globin a β-globin. |
| CDS |
Oblasť kódujúca pre proteíny a kódovacie postupnosti pre antigeny, antitela alebo iné funkčné proteíny. |
Optimalizácia kodónov zvyšuje úroveň prekladu, pričom sa poznamenáva, že niektoré neoptimálne kodóny môžu hráť rolu v ohybe bielek. |
| 3' UTR |
Regulujú preklad mRNA a stabilitu mRNA. |
Pre IVT mRNA sa preferujú prirodzené UTR vysoce exprimovaných génov, ako sú α-globin a β-globin. |
| 3' polyA chvost |
Regulujú expresiu bílkovín a chránia kapovú štruktúru pred degradáciou. |
Vyžaduje sa dostatočná dĺžka (100-150 bp); kódovanie polyA chvosta na plazmidovej transkripčnej šablóne zabezpečí presnejšiu dĺžku polyA chvosta. |
Naše vlastnosti
- Diverzifikovaný výber UTR zdrojov
Viaceré zdroje prirodzených a modifikovaných knižníc UTR vysoce exprimovaných génov; zrelá stratégia modifikácie UTR;
- Inovatívny tím pre optimalizáciu CDS
Spolupracujte s profesionálnym tímom algoritmov umelej inteligencie na dokončenie optimalizácie kodónov.
- Rovnomerné rozloženie polyA chvostu
Pridajte polyA postupnosti podľa DNA šablón, aby ste presnejšie ovládali dĺžku mRNA.
- Rozmanité kombinácie optimalizácie
Dosiahnite účinné vyjadrenie mRNA s nízkou imunogennosťou.
Prípadová štúdia<br>
Návrh sekvencie dvojitého reportérského mRNA: mCherry-eGFP mRNA
Služba mRNA od Yaohai Bio-Pharma sa neustále vylepšuje pomocou návrhu a optimalizácie tandemovej sekvencie dvojitých reportérskych génov, čo umožňuje spoločné vyjadrenie dvoch génov.
Pomocou konvenčného transférového liečidla sa tandemová sekvencia dvojitých génov mCherry-eGFP mRNA transfekuje do buniek 293T a po 48 hodinách sa detekujú dve fluorescenčné signály mCherry (červená) a zväčšená zelená fluorescenčná bielecina (eGFP) s simultánne vyjadrením, pričom zásobníkový graf je zdôraznený žltou farbou.
Vyjadrenie mRNA mCherry-eGFP v bunkách 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
