V porovnaní s dvojitou enzymatickou metódou zakončenia umožňuje jednopásmovej spoločnej transkripčnej metóde významne zjednodušiť technologický postup. Táto metóda je orientovaná na výsledok a zahŕňa pridanie zakončovacích analógov do reakcie in vitro transkripcie (IVT). Zakončovacie analógy môžu byť úvodzene na začiatku transkripcie a po jej ukončení sa získava mRNA so štruktúrou zakončenia. Súčasné tretie generácie zakončovacích analógov môžu predchádzať opačnému zakončeniu a priamo pridať Cap 1 štruktúru k produktnému transkriptu.
Z hľadiska imunogennosti mRNA v vivo a efektívnosti prekladu je proces IVT často vybaven istými typmi úprav NTP, a bežné úpravy nukleotidov sú pseudouridín (Ψ), N1-methyl-pseudouridín (N1Ψ) a 5-methylcytosín (5mC).
Obrázok: Schéma reakcie ko-transkripčného zakončenia mRNA
Podrobnosti služby
Služby |
Podrobnosti služby |
Doba dodania (pracovné dni) |
Ko-transkripčné zakončenie |
In vitro transkripčná odpoveď (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Úpravy nukleotidov (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Odstránenie DNA šablóny (DNase I) |
Optimalizácia podmienok IVT - voliteľné |
Návrh a optimalizácia komponentov reakcie |
3-7 |
Naše vlastnosti
- Rozmanité stratégie úpravy nukleotidov
Viaceré voliteľné stratégie úpravy nukleotidov môžu zlepšiť expresiu bílkovín.
- Optimalizovaný reakčný systém
Dosiahnuť vysoký pomer transkripcie a vysokú účinnosť zakončenia.
- Stabilný proces zakončovania
Dosiahnuť stupeň zakončovania viac ako 95 %.
Efektívne zabrániť degradácii mRNA prostredníctvom prísnej kontroly RNase v experimentálnom prostredí a spotrebičoch.
Prípadová štúdia<br>
Yaohai Bio-Pharma vybudovala dozrelú platformu na spoločnú transkripciu s procesom zakončovania, pri ktorej sa používajú čisté kapanalogické látky na priame pridanie štruktúry Cap1 a zaroven sa vyhýba opačnému zakončeniu. Po štandardizovanom predspracovaní vzoriek a detekcii kapilárneho elektroforetického (CE) merania môže stupeň zakončovania mRNA zvyšenej zelené fluorescenčnej bílkoviny (eGFP) dosiahnuť viac ako 95 %.
účinnosť zakončovania mRNA eGFP viac ako 95 %
EGFP mRNA a mCherry mRNA pripravené pomocou spoločného transkripčného zakončenia boli transfekované do buniek 293T, resp. a po 48 hodinách sa pozoruje silný fluorescenčný signál, čo naznačuje, že mRNA je účinne vyjadrená v bunkách 293T.
Výraz eGFP mRNA a mCherry mRNA v bunke 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
