Yaohai Bio-Pharma pripravuje circRNA na základe systému PIE (zarovnanie exonov a intronov), čo sa opiera o samospojovaciu funkciu typu I intronov na dosiahnutie cyklicitu RNA. Struktúra PIE je navrhnutá pomocou genu T4 td alebo predchodia gena rybího tRNA a usporiadanie je nasledujúce:
RNA intron a podporný exon sú rozdelené na dve časti (5' koniec a 3' koniec), kde sa postupnosť 5' konca presunie na konec cieľovej postupnosti, postupnosť 3' konca sa vloží pred cieľovú postupnosť a cieľová génová postupnosť je vložená uprostred.
Pod katalýzou GTP vedie štruktúra PIE k cykličnosti postupov iných ako introny. Spolu s rozumnou stratégiou zvyšovania rýchlosti cykličnosti môže Yaohai Bio-Pharma dosiahnuť cykličnosť postupov až 4 kb s úspešnosťou viac než 80 %.
Obrázok 1. In vitro cykličnosť circRNA na báze systému PIE
Detaily služieb
| Proces |
Voliteľná služba |
Podrobnosti služby |
Doba dodania (pracovné dni) |
| návrh a optimalizácia postupu pre circRNA |
Návrh a optimalizácia kódovacích sekvencií |
Zarovnanie CDS sekvencie
Optimalizácia CDS kodónov
|
1 |
| Návrh a optimalizácia nekódovacích postupností |
Návrh a optimalizácia postupnosti intrónov a exónov
Návrh a optimalizácia postupnosti homologických ramien
Návrh a optimalizácia postupnosti oddeľovača
|
1-2 |
Bežné strategie na návrh postupu mRNA
| Komponenty circRNA |
Biológicke funkcie |
Strategie optimalizácie |
| Dvojterminové postupnosti intrónov a exónov |
GTP-katalyzované samoexonovanie intrónu pre cyklikáciu postupností mimo intrón. |
Navrhované podľa genu T4 td alebo predchodcu genu tRNA rybího oleja. |
| Kódovanie |
IRES |
Interný ribozomálny poznávací miesto, ktoré reguluje preklad circRNA. |
Výber sekvencií interného ribozomálneho vstupného miesta (IRES) z rôznych vírusových zdrojov, napr. EMCV, CVB3 zdroje. |
| CDS |
Oblasť kódovania bielek, sekvencie kódovania antigenov, antitela alebo iných funkčných bielek. |
Optimalizácia kodónov zvyšuje úroveň prekladu; niektoré neoptimálne kodóny môžu mať vplyv na sčúvanie bielek. |
| Nekódovanie |
Nekódovacie sekvenčky |
Cieľové miery miRNAs alebo bielek na vykonávanie regulácie genu alebo bielek. |
Cieľové namierenie špecifických väzobných miest pre miRNA alebo proteíny môže opakovať sekvencie vázobného miesta. |
Naše vlastnosti
- Optimalizovaný systém cyklicitácie PIE kombinovaný s rozumnými optimalizačnými stratégiami na dosiahnutie úrovne cyklicitácie viac ako 80%;
- Spolupráca s inovatívnym tímom pre optimalizáciu CDS spolu s profesionálnym tímom algoritmov AI na dokončenie optimalizácie kodónov regiónu CDS;
- Zrelý a dokonalý proces circRNA sa dá dosiahnuť s vysokou účinnosťou cyklicitácie, vysokou stabilitou a vysokou účinnosťou prekladu.
Prípadová štúdia<br>
Yaohai Bio-Pharma spustila kontrolný produkt zväčšená zelenofluorescenčná bielec (eGFP) circRNA, ktorá je založená na systéme PIE na dosiahnutie cyklicitácie RNA.
Pomocou konvenčného transférového reagantu sa eGFP circRNA transfekuje do buniek 293T a po 24 hodinách je možné zaznamenať zelenofluorescenčný signál (eGFP), ktorý sa po 48 hodinách zväčší. Fluorescenčný signál sa dá stále detegovať aj na siedmy a čtrnásty deň po transfekcii.
In vitro overenie vyjadrenia eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
