Význam asetáže účinnosti mRNA
S rýchlym rozvojom vakcín a liečiv na báze mRNA je potrebná špecifická skupina analytických metód na testovanie účinnosti (definovania ich biologickej aktivity), ktoré zahŕňajú prekladovú efektívnosť mRNA. Tieto metódy sú obvykle založené na celičkovej transfekcii a funkčných asetážach cieľového proteínu.
Yaohai Bio-Pharma ponúka celičkovo založené asetáže účinnosti pre látky mRNA alebo produkty LNP, vrátane celičkovej transfekcie (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 bunky atď.) a ELISA alebo Western Blotting (WB) asetáže.
Regulačné požiadavky pre asetáže účinnosti
Podľa úvah WHO o regulácii, „Mocnosť každého dávky konečnej vakcíny by mala byť určená pomocou vhodnej kvantitatívnej a overenej funkčnej metódy. Potenciálne in vitro testy na mocnosť môžu zahŕňať bunecné transfekčné systémy alebo bezbunecné testy.“ A USP odporúča „bunecný asay“ na skúmanie mocnosti mRNA, t.j. výrobu cieľového proteínu.
Postup
Krok 1. Bunecná transfekcia s mRNA alebo mRNA-LNP
Bunky sú kultivované a transfikované s mRNA alebo mRNA-LNP. Detailne, mRNA je transfikovaná po zmiešaní s transfekčným reagentom, kým mRNA-LNP je priamo transfikovaná do buniek. Po 24-48 hodinách vyčistite nadmerné látky obsahujúce exprimovaný proteín centrifugáciou.
Krok 2. Funkčné testy cieľového proteínu
Vykonajte ELISA alebo WB asesmy, aby ste zhodnotili funkčné väzby cieľových bílkovín.
Prípadová štúdia<br>
Bunkové testy účinnosti ukážkov mRNA
Yaohai-BioPharma vyvinula bunkovú metódu testovania účinnosti mRNA, ktorá zahŕňa bunecné kultúry, transfekciu buniek a funkčné testy bílkovín. Transfikovali sme eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferázu mRNA, spike protein mRNA do buniek 293T a detegovali sme cieľové bílkoviny pomocou fluorescenčného, luminescenčného alebo farebného signálu, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
