Sammenlignet med den to-trinns enzymatiske kappingen, kan en-trinns co-transkripsjonell kappemetode redusere prosessflyten betydelig. Metoden er resultatorientert og innebærer tilsetning av cap-analoger til in vitro-transkripsjonsreaksjonen (IVT). Cap-analoger kan introduseres ved starten av transkripsjon, og mRNA med cap-struktur kan oppnås ved fullføring av transkripsjon. Gjeldende tredjegenerasjons cap-analoger kan unngå omvendt tak og legge til Cap 1-struktur direkte til transkripsjonsproduktet.
Av hensyn til mRNA in vivo-immunogenisitet og translasjonseffektivitet, vedtar IVT-prosessen ofte visse typer modifiserte NTP-er, og vanlige modifiserte nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridine (N1Ψ) og 5-metylcytosin (5mC) .
Figur: Diagram over mRNA Co-transcriptional and Capping Reaction
Tjenestedetaljer
Service |
Tjenestedetaljer |
Leveringsperiode (arbeidsdag) |
Co-transkripsjonsbegrensning |
In vitro transkripsjonsrespons (Clean Cap-analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifikasjoner (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Fjerning av DNA-template (DNase I) |
IVT tilstandsoptimalisering - valgfritt |
Reaksjonskomponentdesign og optimalisering |
3-7 |
Våre funksjoner
- Diversifiserte nukleotidmodifikasjonsstrategier
Flere valgfrie nukleotidmodifikasjonsstrategier kan forbedre proteinuttrykk.
- Optimalisert reaksjonssystem
Oppnå et høyt transkripsjonsforhold og høy avdekningseffektivitet.
Oppnå et tak på mer enn 95 %.
- Strenge kontroll av RNase
Forhindre nedbrytning av mRNA effektivt ved streng kontroll av RNase i det eksperimentelle miljøet og forbruksvarer.
Case study
Yaohai Bio-Pharma har bygget en moden co-transkripsjonell kappingsprosessplattform, ved å bruke clean cap-analoger for direkte å legge til Cap1-struktur samtidig som man unngår omvendt kapping. Etter standardisert prøveforbehandling og påvisning av kapillærelektroforese (CE), kan avgrensningsgraden for mRNA for forsterket grønt fluorescerende protein (eGFP) nå mer enn 95 %.
eGFP mRNA-begrensningseffektivitet på mer enn 95 %
eGFP-mRNA og mCherry-mRNA fremstilt ved co-transkripsjonell kapping transfekteres til henholdsvis 293T-celler, og et sterkt fluorescerende signal observeres etter 48 timer, noe som tyder på at mRNA uttrykkes effektivt i 293T-celler.
Ekspresjon av eGFP mRNA og mCherry mRNA i 293T Cell
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
