Når det gjelder masseproduksjon av mRNA, er in vitro transkripsjon (IVT) en mer effektiv og moden metode. IVT-reaksjonen tar i bruk linearisert plasmid-DNA som inneholder T7-promotoren som en mal, og mRNA syntetiseres med nukleosidtrifosfater (NTP-er) som substrater i nærvær av T7-RNA-polymerase.
Nukleotidmodifikasjon er et gjennombrudd i utforskningen av mRNA, der umodifiserte mRNA-molekyler gjenkjennes av intracellulære RNA-sensorer for å aktivere medfødt immunitet. For hensyn til mRNA in vivo-immunogenisitet og translasjonseffektivitet, bruker IVT-prosessen vanligvis visse typer modifiserte NTP-er, og vanlige modifiserte nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridin (N1Ψ) og 5-metylcytosin (5mC).
In vitro transkripsjonsprosess av mRNA
In vitro transkripsjon (IVT) reaksjonsdiagram
Tjenestedetaljer
Valgfri tjeneste | Tjenestedetaljer | Leveringsperiode (arbeidsdag) |
In vitro transkripsjon (IVT) | IVT, In vitro transkripsjon | 1 |
| Nukleotidmodifikasjoner (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Fjerning av DNA-template (DNase I) |
IVT tilstandsoptimalisering - valgfritt | IVT reaksjonskomponenter design og optimalisering | 2-5 |
Våre funksjoner
- Diversifiserte nukleotidmodifikasjonsstrategier
Forbedre mRNA-stabilitet og proteinuttrykk in vivo.
- Streng testdesign og optimalisering
mRNA-fragmentpreparering opp til 10 kb kan oppnås.
Ved å optimalisere IVT-reaksjonsforholdene er transkripsjonshastigheten opptil 1:200.
- Strenge kontroll av RNase
Strenge kontroll av RNase gjennom et eksperimentelt miljø og forbruksvarer kan effektivt forhindre mRNA-nedbrytning.
case Study
Det nåværende IVT-reaksjonssystemet er grovt optimalisert for syntetiske systemer med en lengde på omtrent 100 nt, ikke for mRNA-er av vilkårlig lengde. Jo lengre mRNA-sekvensen er, desto vanskeligere er det å transkribere og jo mer utsatt er det for nedbrytning.
For å lage tilpassede mRNA-sekvenser med en lengde på ca. 10 kb, har Yaohai Bio-Pharma med suksess utarbeidet prøver av høy kvalitet med et høyt transkripsjonsforhold på 1:135 og oppnådd 135 μg opprinnelig rensede mRNA-produkter etter 1 μg linearisert plasmid ble transkribert in vitro gjennom streng eksperimentell design, kontinuerlig optimalisering av reaksjonsbetingelser og streng kontroll av RNase.
mRNA-identifikasjon (agarosegelelektroforese)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
