Sirkulært mRNA (circRNA) har blitt mye brukt i studiet av gen- eller proteinfunksjoner. I mellomtiden er det populært i utviklingen av profylaktiske og terapeutiske biologiske midler, som ligner på mRNA.
Yaohai Bio-Pharma har etablert et sett med circRNA-synteseteknologier for å gi høykvalitets RNA, som sekvensdesign og optimalisering, in vitro-transkripsjon (IVT), sirkularisering/syklisering, rensing og lipid nanopartikkel (LNP) innkapsling. Alle produktene er utgitt under de strenge kvalitetskontrollstandardene (QC).
Sammenlignet med lineært mRNA, er sirkulært RNA (circRNA) mer stabil i strukturen og er et viktig hot spot i dagens nukleinsyremedisinforskning. Den har et bredt spekter av bruksområder innen forskjellige felt, enten som koder for circRNA eller ikke-kodende circRNA, inkludert profylaktiske vaksiner for infeksjonssykdommer, terapeutiske onkologiske vaksiner, terapeutiske onkologiske legemidler, proteinerstatningsterapi, regenerativ medisin, celle- og genterapi (CGT) , molekylær svamprolle og RNA-aptamer.
Prosess | Valgfri tjeneste | Tjenestedetaljer | Leveringsperiode (dag) |
circRNA sekvensdesign og optimalisering | Design og optimalisering av kodesekvenser | CDS-kodonoptimalisering | 1 |
Design og optimalisering av ikke-kodende sekvenser | Intron og Exon Sequence, Homolog Arm and Spacer Design and Optimization | 1-2 | |
Sirkulært plasmidpreparat | Gensyntese | Gensyntese (tredjepart) | 7-10 |
Plasmidamplifikasjon | Plasmidamplifikasjon | 2 | |
Plasmidekstraksjon | |||
Linearisert plasmid-preparat | Plasmid linearisering og rensing | Plasmid linearisering | 1 |
Linearisering DNA-rensing | |||
In vitro transkripsjon og syklus | In vitro transkripsjon og syklus | In vitro transkripsjon og cykliseringsreaksjoner | 1-2 |
RNase R Fordøyelse | |||
Optimalisering - valgfritt | Reaksjonssammensetning, tidsoptimalisering | 2-5 | |
circRNA-rensing | Konvensjonell rensemetode | Litiumkloridutfelling | 1 |
Magnetisk perlerensing | 1 | ||
Svært ren circRNA-rensing | Preparativ høyytelses væskekromatografi (HPLC) | 1-2 | |
Bufferutveksling | Ultrafiltrering | 1 | |
circRNA Lyofilisering | Prøvefylling | Gresskarfyll | 2-3 |
Lyofilisering | Forfrysing | ||
Primær tørking (sublimering) | |||
Sekundær tørking (desorpsjon) | |||
circRNA-LNP-innkapsling | LNP-innkapsling | Materiale og flytende forbehandling | 2 |
Mikrofluidisk enhetsblanding | |||
Bufferutveksling | Tangentiell strømningsfiltrering | 1 | |
Sterilisere | Filtrering | ||
Kvalitetskontroll av plasmid-DNA | Konsentrasjon/renhet | Ultrafiolett (UV) spektrofotometri | 1-2 |
Plasmidkonformasjon | Agarosegelelektroforese (AGE) | ||
Kapillærelektroforese (CE) - Valgfritt | |||
Plasmididentifikasjon | Restriksjonsenzymidentifikasjon/ALDER | ||
Kvalitetskontroll av circRNA | Konsentrasjon/renhet | Ultrafiolett (UV) spektrofotometri | - |
Purity | Agarose Gel Elektroforese (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-valgfritt | 1 | ||
Kvalitetskontroll av circRNA-LNP | Innkapslingseffektivitet | RiboGreen metode | 1 |
Partikkelstørrelse | Dynamisk lysspredning (DLS) | 1 | |
Polydispersitetsindeks | Dynamisk lysspredning (DLS) | 1 | |
Zeta-potensial | Dynamisk lysspredning (DLS) | 1 | |
Cellebasert potensanalyse | Celletransfeksjon | Celleplettering, celletransfeksjon | 4 |
Målproteindeteksjon | Fluorescensobservasjon, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Vi transfekterte forbedret grønt fluorescerende protein circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA til 293T-celler, og oppdaget målprotein gjennom fluorescens, luminescerende eller fargesignal, western blot (WB), enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA).
Cellebaserte potensanalyser av circRNA-prøver av Yaohai Bio-Pharma