Yaohai Bio-Pharma tilbereder circRNA basert på PIE-systemet (justering av eksoner og introner), som er avhengig av selvspleisingsfunksjonen til type I-introner for å oppnå RNA-syklisering. PIE-strukturen er designet ved å bruke T4 td-genet eller fishy tRNA-forløpergenet, og arrangementet er som følger:
RNA-intronet og det støttende eksonfragmentet er delt inn i to deler (5'-terminal og 3'-terminal), hvor den 5'-terminale sekvensen overføres til halen av målsekvensen, den 3'-terminale sekvensen settes inn i fronten av målsekvens, og målgensekvensen settes inn i midten.
Under katalyse av GTP fører PIE-strukturen til cyklisering av andre sekvenser enn introner. Kombinert med en rimelig forbedringsstrategi for cyclization rate, kan Yaohai Bio-Pharma oppnå cyclization av sekvenser opp til 4 kb med en cyclization rate på mer enn 80%.
Figur 1. In vitro sirkulasjon av circRNA basert på PIE-systemet
Tjenestedetaljer
| Prosess |
Valgfri tjeneste |
Tjenestedetaljer |
Leveringsperiode (arbeidsdag) |
| circRNA sekvensdesign og optimalisering |
Design og optimalisering av kodesekvenser |
CDS-sekvensjustering
CDS kodonoptimalisering
|
1 |
| Design og optimalisering av ikke-kodende sekvenser |
Intron og exon sekvensdesign og optimalisering
Homolog armsekvensdesign og optimalisering
Spacer sekvens design og optimalisering
|
1-2 |
Vanlige strategier for mRNA-sekvensdesign
| CircRNA-komponenter |
Biologiske funksjoner |
Optimaliseringsstrategier |
| To-terminale intron- og eksonsekvenser |
GTP-katalysert intron-selvspleising for cyklisering av sekvenser utenfor intronet. |
Designet i henhold til T4 td-genet eller fiskeolje-tRNA-forløpergenet. |
| Koding |
IRES |
Internt ribosomgjenkjenningssted som regulerer oversettelsen av circRNA. |
Screening av interne ribosomentry site (IRES) sekvenser fra forskjellige virale kilder, f.eks EMCV, CVB3 kilder. |
| CDS |
Proteinkodende regioner, sekvenser som koder for antigener, antistoffer eller andre funksjonelle proteiner. |
Kodonoptimalisering øker oversettelsesnivået; visse ikke-optimale kodoner kan spille en rolle i proteinfolding. |
| Ikke-koding |
Ikke-kodende sekvenser |
Målrett miRNA eller proteiner for å utøve gen- eller proteinregulering. |
Målretting av spesifikke bindingssteder for miRNA eller proteiner kan gjenta sekvensene til bindingsstedet. |
Våre funksjoner
- Optimalisert PIE Cyclization System Kombinasjon med rimelige optimaliseringsstrategier for å oppnå en cyclization rate på mer enn 80 %;
- Nyskapende CDS-optimaliseringsteam Samarbeid med profesjonelt AI-algoritmeteam for å fullføre optimaliseringen av CDS-regionkodoner;
- Moden og perfekt prosess circRNA kan oppnås med høy cykliseringseffektivitet, høy stabilitet og høy translasjonseffektivitet.
Case study
Yaohai Bio-Pharma lanserte kontrollproduktet enhanced green fluorescent protein (eGFP) circRNA, som er basert på PIE-systemet for å oppnå cyclization av RNA.
Ved å bruke et konvensjonelt transfeksjonsreagens transfekteres eGFP circRNA inn i 293T-celler, og eGFP (grønt) fluorescerende signal kan detekteres etter 24 timer, som vil bli forsterket etter 48 timer. Fluorescenssignalet kan fortsatt detekteres på den 7. dagen og den 14. dagen etter transfeksjon.
In vitro ekspresjonsvalidering av eGFP circRNA
NO
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
