Rekombinante proteiner ser ofte oksidasjon av eksponerte aminosyresidekjeder, som tryptofan (Trp) og metionin (Met), og endrer de fysisk-kjemiske egenskapene til proteiner. Disse endringene kan i sin tur bidra til å endre de biologiske funksjonene til de berørte proteinene, slik som tap av binding, reduksjon av enzymatisk aktivitet, uventet rask clearance. Proteiner er viktige mål for oksidative reaksjoner fordi de reagerer raskt med oksidanter og er rikelig i celler, ekstracellulært vev og kroppsvæsker.
Derfor er overvåking av proteinoksidasjon avgjørende for vellykket biofarmasøytisk utvikling.
Yaohai Bio-Pharma tilbyr aminosyreoksidasjonsanalysetjeneste, som lar deg bestemme aminosyreoksidasjonen ved hjelp av væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS).
Vi har vært involvert i proteinstrukturkarakterisering av forskjellige store molekyler, inkludert rekombinante underenhetsvaksiner, nanostoffer/VHHs/enkeltdomene antistoffer (sdAbs), antistofffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vekstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav for aminosyreoksidasjon
I henhold til retningslinjene for ICH Q6B kan oksiderte former påvises og karakteriseres ved kromatografiske, elektroforetiske og/eller andre relevante analytiske metoder (f.eks. High Performance Liquid Chromatography (HPLC), kapillærelektroforese, massespektroskopi, sirkulær dikroisme).
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Aminosyreoksidasjon |
LC-MS, omvendt fase høyytelses væskekromatografi (RP-HPLC) eller hydrofob interaksjonskromatografi høyytelses væskekromatografi (HIC-HPLC) og massespektrometri |
Analytiske prosedyrer
1. Prøveforberedelse
2. LC-MS
3. Dataanalyse
Tryptofan (Trp)-rester er spesielt utsatt for oksidasjon på grunn av den høye reaktiviteten til den aromatiske indolen med reaktive oksygenarter. Trp-oksidasjon krever en viss eksponering av Trp-rester som normalt er begravd i den tredimensjonale strukturen til proteinet.
Men når Trp-rester oksideres, kan de omdannes til en rekke produkter med svært forskjellige egenskaper fra den opprinnelige Trp. Den vanligste veien for Trp-oksidasjon inkluderer dannelsen av N-formylkinurenin (masseforskjell: +32).
En annen vanlig oksidert aminosyre er metionin. Svovelatomet i Met-resten kan akseptere enten ett eller to oksygenatomer som fører til dannelse av sulfoksid (masseforskjell: +16) eller sulfon (masseforskjell: +32), tilsvarende. Denne modifikasjonen er relativt vanlig på grunn av den typisk høye overflateeksponeringen av Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
