Betydningen av belastningsscreening
Screening av egnede verter er nødvendig for biologisk CMC-utvikling, som bestemmer kvaliteten og konsistensen til produktet og produksjonsprosessen. Det direkte målet med vertsscreening er å gi en kandidat primær cellebank (PCB), med høye ekspresjonsnivåer og høy stabilitet både når det gjelder passasjestabilitet og lagringsstabilitet. Screening av passende vert er nødvendig av to hovedgrunner:
- Først å velge den mikrobielle verten med et høyt ekspresjonsnivå. Det er flere kommersielt tilgjengelige stammer, som brukes til å uttrykke forskjellige typer proteiner, som giftige proteiner, løselige proteiner eller eukaryote proteiner.
– For det andre å screene verten med genetisk stabilitet. Testing av genetisk stabilitet er et nøkkelpunkt gjennom hele produksjonens livssyklus. Det antydes at høy genetisk stabilitet er anerkjent som en annen nøkkelegenskap for passende stamme.
Nøkkelord: utvalg av mikrobiell stamme, screening av mikrobiell stamme, screening med høy gjennomstrømning av bakterier eller gjær, høyproduserende stammescreening, svært stabil stammescreening, genetisk stabil stammescreening Anvendelse: humanmedisin, dyremedisin, vaksine, syntetisk biologi, rekombinant stort molekyl biologiske reagenser
Strain Screening Services av Yaohai Bio-Pharma
Ved å dra nytte av over 10 års CDMO-erfaring innen mikrobiologisk biologi, støtter vi utvikling og produksjon av ulike store molekyler, inkludert rekombinante underenhetsvaksiner, viruslignende partikler (VLP), hormoner (insulin, GLP-1, veksthormon), cytokiner ( Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), vekstfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanostoffer/enkeltdomene antistoffer (sdAbs), enzymer, etc.
Vi har samlet rike erfaringer med valg av ulike typer plasmidvektorer og mikrobielle verter, inkludert bakterier Escherichia coli (E. coli), og gjær Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Vi kan finne det beste uttrykkssystemet for dine unike biologiske stoffer.
Vi samlet ulike mikrobielle verter med klare kilder og standard CoA, bl.a E.coli uttrykk og gjæruttrykk.
Tjenestedetaljer
|
Tjenester
|
Tjenestedetaljer
|
Minimum tidslinje/dag
|
leveransen
|
|
Stammekonstruksjon (E. coli)
|
Plasmidtransformasjon (multiverter)
|
5
|
COA for kommersielle verter Strain konstruksjonsrapport
|
|
PCR-verifisering
|
|
Stammerensing
|
|
Stammekonservering
|
|
Stammekonstruksjon (gjær)
|
Forberedelse av kompetente gjærceller
|
10
|
|
Plasmid linearisering
|
|
Elektrotransformasjon
|
|
Resistens/Ernæringsmangelscreening
|
|
Stammerensing
|
|
Stammekonservering
|
|
Egnet vertsscreening
|
Plasmid- eller genom-DNA-ekstraksjon
|
15-20
|
VertsscreeningsprosessCOA for konstruerte stammer
|
|
PCR-verifisering, restriksjonsenzymfordøyelse
|
|
Målgensekvensering
|
|
Screening av høyekspresjonsverter
|
|
Screening av verter med genetisk stabilitet
|
|
Stammekonservering
|
Case study
En passende vert forbedrer proteinekspresjonsnivået med 2.5 ganger.
Vi har i oppdrag å utvikle høyproduserende E. coli press. Og vi prøvde tre typer reklame E. coli verter, basert på egenskapene til målprotein. Det er vist at stammene S1-1 og S1-2 (Fig A: Bane 1,2) forbedret proteinnivået til 3.5 ganger enn klientens opprinnelige stamme (Fig A: Bane 3).
Dessuten utførte stammen S1-1 høy genetisk stabilitet (fig B), og den ble anerkjent som kandidatstamme for primær cellebanking (PCB).
Våre tjenestefunksjoner
Demonstrert ekspertise med ulike mikrobielle verter, f.eks. E. coli DH5a, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink stamme 1/2/3/4; S. cerevisiae og H. polymorpha.
Vi har erfaring med E. coli periplasmatisk sekresjon, løselig og inklusjonskroppsekspresjon, samt intracellulær gjær eller sekresjonsekspresjon. Vi tilsetter ingen antibiotika eller legger til antibiotika under regulatorisk veiledning.
Vi etablerer en screeningsplattform med høy gjennomstrømning for å screene høyproduserende og stabile stammer fra over hundre kandidatstammer.
Det er sikret at prosessen med strain engineering og screening er sporbar, under Good Data and Record Management.
NO
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
