CircRNA-forberedelse krever lineær RNA som forhåndsstoff (RNA-forhåndsstoff) for sirkulering, der RNA-forhåndsstoffet vanligvis forberedes ved å bruke lineært plasmid-DNA som transkripsjonsmal og transkriberes in vitro med hjelp av T7 RNA-polymerase.
Høykvalitets plasmid-DNA er avgjørende for in vitro-transkription (IVT). Basert på den modne plasmidforberedelsesplattformen kan Yaohai Bio-Pharma tilby et tjeneste for forberedelse av høyreinhet og standardisert lineært plasmid-DNA (pDNA) for å sikre integriteten av IVT-produkter.
Prosess | Valgfritt tjeneste | Tjenestedytninger | Leveringsperiode (arbeidsdag) |
Forberedelse av sirkulær plasmid | Genesynthese | Genesynthese (Tredjepart) | 7-10 |
Plasmidforstørring | Plasmidforstørring | 2 | |
Plasmiduttrekking | |||
Forberedelse av linearisert plasmid | Plasmidlinjarisering og -renasjon | Plasmidlinearisering | 1 |
Renasjon av linearisert DNA | |||
Kvalitetskontroll av plasmid-DNA | Kontrastrenhet | Ultraviolet (UV) Spektrofotometri | 1-2 |
Plasmid konformasjon | Agarosegelelektroforese (AGE) | ||
Kapillær Elektrofose (CE) - Valgfritt | |||
Plasmid identifisering | Restriksjonsenzymeidentifisering / AGE |
Fleksibel utvalg av lineariseringsmetoder
Optimalisering av DNA-ekstraksjon og renningsmetoder for å oppnå høye gjenvinningsrater.
Strikte prosesskontrollstandarder, med en superhelikal konformasjonsrate på plasmidprøver for forskning på over 80%.
Høy standard og effektive tjenester for plasmidforberedelse og kvalitetskontroll for å møte eksperimentelle behov.
Med Yaohai Bio-Pharmas produkt mCherry circRNA som eksempel, er superkretthetsforholdet av transkripsjonstemplateplasmidprøver (forskningsgrad) mer enn 70%, med en lineariseringsrate på nærmere 100%.
mCherry circRNA forberedes med linearisert plasmid som template og transfekteres inn i 293T-celler. Et høyt nivå av fluoresensuttrykk (rød fluoresens) oppdages etter 24 timer med transfeksjon, som vil økes etter 48 timer, og kan fortsatt oppdages på den syvende og fjortende dagen etter transfeksjon.
mCherry-proteinet uttrykkes stabil og effektivt, og renheten av transkripsjonstemplaten kan oppfylle kravene til circRNA-lægemiddelprodukt (DP) av høy kvalitet.
In vitro validering av uttrykk av mCherry circRNA