Leverandør Chromatografi-Massespekstometri (LC-MS) basert på peptidkartleggingsdata vil gi en stor mengde informasjon om den primære og høyere ordens strukturen til naturlige og rekombinante proteiner, herunder aminosyrfølgedekning, post-translasjonelle modifikasjoner (PTM, f.eks. glykosylering, oksidasjon, deamidering), disulfidbindinger, osv.
Yaohai Bio-Pharma tilbyr peptidkartleggingsanalyse tjenester for ditt målprotein ved LC-MS, for å akselerere forskningen din på proteinstruktur.
Vi har vært in involvert i Proteinstrukturkarakterisering av ulike store molekyler, inkludert Rekombinant Subunit Vaksiner, Nanokropper/VHHs/Enkeldomeneantikropp (sdAbs), Antikroppfragmenter, Hormoner/Peptider, Sytokiner, Vekstfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener, osv.
Reguleringskrav for Peptidkartlegging
ICHQ6B retningslinje anbefaler, «Velg fragmentering av produktet i diskrete peptider utføres ved bruk av egne enzym eller kjemikalier og de resulterende peptidfragmentene analyseres ved HPLC eller andre tilstrekkelige analytiske prosedyrer. Peptidfragmenter bør identifiseres så godt som mulig ved bruk av teknikker som aminosyrekomposisjonsanalyse, N-terminal sekvensering eller massespektrometri (MS). Peptikkartlegging av det aktive stoffet eller legemiddelproduktet (DP) ved bruk av en tilstrekkelig validert metode er en metode som ofte brukes for å bekrefte den ønskede produktstrukturen for batchfrigivelse.»
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Peptidkartlegging |
Proteasefordeling og Væskestyrtromatografi-Masspektrometri (LC-MS) |
Analytisk Prosedyre
1. Reduksjon og Alkylering
Formålet er å redusere disulfidbroer og blokkere det genererte frie thiolen. Reduksjon av disulfidbroer hjelper til å åpne proteinstrukturen, noe som gjør proteolytisk fordøyning mer effektiv. Denne trinnet vil også bryte broene mellom kjedere i tilfelle av flerkjedeproteiner som har disulfidbroer som kobler kjedere (f.eks. monoklonale antistoffer, mAbs).
2. Fordøyning av proteinet ved bruk av enzymer
Formålet er å bryte proteinet ned til peptider. Vi velger enzymer basert på det teoretiske sekvenset til proteinet og kunnskapen om teoretisk fordøyning av proteinet av enzymer. Ved å velge enzymer på denne måten, skal det resultere i den beste peptidkartleggingsanalyse.
3. Analyse av de fordøyde peptidene Bruk av On-line Revers Fase-Høytrykksvæskekjromatografi med Ultraviolet (UV) og Elektrospray-Massespektraloppdagelse (LC/ES-MS).
Peptidskilning basert på polaritet ved bruk av LC (revers fase-LC)
Når peptidet eluerer fra LC-kolonnen, vil massespektrometeret generere masseinformasjon sammen med fragmentjoninformasjon, som tillater oss å bestemme sekvensinformasjonen. Vi bruker sekvensinformasjonen til å bekrefte peptididentiteten og gi primær informasjon.
Vi kan også generere fragmentasjonsinformasjon fra peptidene når de kommer inn i massespektrometerkilden fra LC-kolonnen. Avhengig av kravene i studien, er dette enten selektiv LC-MS/MS eller ikke-selektiv, som kan betraktes som en form for tandem MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
