5'-end kappering er en nødvendig modifisering av mRNA. mRNAs med kappestrukturer, spesielt Cap1-strukturer, gjør at mRNAs unngår innfødte immunresponser i levende organismen, noe som fører til effektiv proteinoversettelse.
Enzytmessig kappering (den to-trinns-metoden) er den konvensjonelle metoden for mRNA-kappering, lignende på kapperingsprosessen i eukaryotiske organismer. Under virkningen av en serie enzymer blir 7-metylguanin (m7G) koblet til 5'-enden av mRNA gjennom en 5'-5' trifosfatbinding og går gjennom methylasjonsmodifisering for å danne kappestrukturen Cap 1 (m7GpppN).
Diagram over naturlig kappestrukturformasjon
Reaksjonsflyten for enzytmessig kappering er som følger:
Linearisert plasmiddna brukes som mal for in vitro-transkripsjon (IVT) i tilstedeværelsen av T7-polymerase, og mRNA med en 5'-endekappestruktur dannes etter en enkel rensing ved hjelp av vaccinia-kappingseenzyme og 2'-O-metyltransferase.
Tjenester detaljer
Valgfritt tjeneste |
Tjenestedytninger |
Leveringsperiode (Dager) |
mRNA enzymatisk dekkning |
Enzymsk tømmerreaksjon |
1 |
Optimering av tømmerreaksjon - valgfri |
Design og optimering av reaksjonskomponenter |
3~7 |
Våre funksjoner
- Design og optimering av tømmerreaksjonskomponenten
Tømmerreaksjonskomponenten er optimert, og produksjonen av mRNA-transkriptet økes betraktelig.
- Verifisering av in vitro-uttrykk
Det tømmede mRNA transfekteres inn i 293T-celler, og uttrykkelsen av målproteinet kan bli detektert.
Gjennom strikt kontroll av RNase på eksperimentell miljø og forbruksgoder, forebygges degradasjon av mRNA effektivt.
Casestudie
Yaohai Bio-Pharmas mRNA-plattform har bygget opp en fullstendig tømmerreaksjonsprosess.
For eGFP mRNA, et mRNA-forprodukt forberedt ved enzymsk tinning, kan en eGFP fluoresenssignal (grønn fluoresens) på høy nivå bli observert etter å ha transfektert 293T-celler i 24 timer, noe som oppdages ved Western Blot (WB), som viser at målproteinen, den forsterkede grønne fluoreserende proteinen (eGFP), kan uttrykkes effektivt in vitro.
Uttrykk av Enzymsk Tinnings eGFP mRNA i 293T Celle
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
