Grunnlaget for inkapsling er design og utvikling av leveringsystemet. Et godt designet leveringsystem lar circRNA-molekyler komme inn i kroppen uten å bli degraderert av RNA-enzym, og deretter effektivt leveres til målstedet, krysser cellemembranen og frigjøres intracellulært.
Lipid nanopartikler (LNPs) er det beste leveringsystemet som finnes, med fordeler i inkapsling, in vivo-uttrykk og in vivo-sikkerhet sammenlignet med andre leveringsystemer. LNPs med nukleinsyresfragmenter blir lett svelget inn i celler og danner intracellulære kroppsdele. Når de kommer inn i cellen, protonerer den surt miljøet i den intracellulære kroppen og gir ionisert lipidhode positiv ladning, slik at den fuser med den indre membranen av den intracellulære kroppen og frigjør målnukleinsyren i cellen for handling.
Yaohai Bio-Pharma circRNA-tjenesten fortsetter å forbedre seg og kan tilby circRNA-LNP-inkapslingstjeneste for å optimere relevante kritiske prosessparametere og forbedre konsekvensen og gjentakeligheten i produksjonen av circRNA-lægemidler.
Prosess | Tjenestedytninger | Leveringsperiode (Dager) | Leveringsvarer |
circRNA-LNP Inkapsling | Materiale- og væskeforebehandling | 2 | circRNA-LNP legemiddelprodukt (DP) |
Mikrofluidisk enhetsblanding | |||
Tangentiel strømfiltrering | 1 | ||
Steriliserende filtrering | |||
circRNA-LNP kvalitetskontroll | Inkapslingsnøyaktighet | 1 | Testavtale |
Partikkelstørrelse og Polydisperositetsindeks | |||
Zetapotensial |
Rask syntese, høy R&D effektivitet og forhånds-optimaliserte løsninger;
Inkapslingsforholdet kan nå over 90%;
Størrelsen på lipidnanopartikler kan kontrolleres ved å endre strøminjeksjonsfrekvensen og forholdet;
circRNA-LNP-produkter valideres ved in vitro celleuttrykk og kan uttrykke det målproteinet effektivt.
LNP-eGFP circRNA-prøver forberedes, og de ulike doser av dem (1ug, 2ug og 4ug) transfekteres direkte inn i 293T-celler for å verifisere om de kan uttrykke det målproteinet. Etter 48 timer med transfeksjon kan en tydelig fluoresenssignaal observeres, og det er en dose-økningseffekt på fluoresensintensiteten.
Lipo-circ_eGFP, som består av liposom og ikke-kapslet eGFP circRNA, tas som en kontroll.