Angående massaproduksjon av mRNA er in vitro transkripsjon (IVT) en mer effektiv og moden metode. IVT-reaksjonen bruker linearisert plasmid-DNA som inneholder T7-promotoren som mal, og mRNA syntetiseres med nukleosidtrifosfat (NTP) som substrat i tilstedeværelsen av T7 RNA-polymerase.
Nukleotidmodifikasjon er en gjennombrudd i utforskningen av mRNA, hvor uendret mRNA-molekyl blir kjent av intracellulære RNA-sensorer for å aktiver innfødt immunforsvar. Av hensyn til mRNA's immungenitett i levende organismene og translasjons-effektivitet bruker IVT-prosessen vanligvis visse typer endrede NTP'er, og vanlige endrede nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-metyl-pseudouridin (N1Ψ) og 5-metylcytosin (5mC).
In vitro-transkripsjonsprosessen av mRNA
Diagram over in vitro-transkripsjonsreaksjon (IVT)
Tjenester detaljer
Valgfritt tjeneste |
Tjenestedytninger |
Leveringsperiode (arbeidsdag) |
In vitro transkripsjon (IVT) |
IVT, In vitro-transkripsjon |
1 |
| Nukleotidmodifikasjoner (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Fjerne DNA-mal (DNase I) |
Optimering av IVT-betingelser - valgfritt |
Design og optimering av IVT-reaktionskomponenter |
2-5 |
Våre funksjoner
- Diversifiserte Nukleotidmodifiseringsstrategier
Forbedrer stabiliteten av mRNA og proteinettrykk in vivo.
- Strikt testdesign og optimering
forberedelse av mRNA-fraksjoner opp til 10kb kan oppnås.
Ved å optimere IVT-reaksjonsbetingelser, er transkripsjonsraten opp til 1:200.
Strikt kontroll av RNase gjennom eksperimentell miljø og forbrukermateriell kan effektivt forhindre degradasjonen av mRNA.
Casestudie
Den nåværende IVT-reaksjonsystemet er omtrentlig optimert for syntetiske systemer med en lengde på om lag 100 nukleotider, ikke for mRNA av vilkårlig lengde. Jo lengre mRNA-sekvensen er, dess vanskeligere er det å transkribere den, og dess mer er den prone for degradasjon.
For å forberede tilpassede mRNA-sekvenser med en lengde på omtrent 10 kb, har Yaohai Bio-Pharma vellykket seg i å forberede høykvalitetsprøver med en høy transkripsjonsforhold på 1:135 og oppnådd 135 μg med førstegangspurifiserte mRNA-produkter etter at 1 μg av linearisert plasmid ble transkribert in vitro gjennom streng eksperimentell design, kontinuerlig optimering av reaksjonsbetingelser og strikt kontroll av RNase.
mRNA-identifikasjon (Agarosegelelektroforese)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
