Betydningen av utvikling av nedstrømsprosess (DSP)
Det hele fermertasjonsbrynet inneholder målprotein eller plasmid, samt produkt- og prosessrelaterte forurensetninger, f.eks. aggreger, mikrobielle cellesubstrater, Vertshelseproteiner (HCP), Vertshellevirv DNA (HCD), endotoxin og antibiotika.
Derfor er det avgjørende å designe en effektiv DSP, rensningsprosess, for å fjerne visse forurensetninger og produsere høygradig renset og høykvalitets legemiddelsubstans. I tillegg kan optimeringen av rensningsprosessen bidra til å øke produkteroppretning, redusere kostnader og forbedre prosessens skalbarhet og gjentakbarhet.
Nøkkelord: prosessutvikling, optimering og validering, rensningsprosess, kromatografi, fjerning av forurensetninger, HCP-fjerning, HCD-fjerning, endotoxin-fjerning, proteindenaturering og refolding, VLP-sammenstilling, konjugering
Anvendelse: Biopartmedisinindustri, menneskelegemidler, dyrelegemidler, vaksiner, rekombinante store molekylære biologiske stoffer, rekombinante biologiske stoffer, biologisk reagens
DSP-løsninger fra Yaohai Bio-Pharma
Vi har omfattende erfaring med å isolere målproteiner eller plasmider fra komplekse matriser ved å utvikle og optimalisere nedstrømsrenseseprosessen. Det finnes ulike typer enhetsoperasjoner som er egnet for renning av biologiske stoffer, inkludert sentrifugering, filtrering, homogenisering, basallysing, ultrafiltrering, nedsetting, proteindenaturering og refolding, kromatografi, osv.
Våre tilgjengelige renningsutviklingstjenester inkluderer:
- Utvikling av hele renningsprosessen fra celle- eller supernatantinsamling til den endelige aktive ingrediensen.
- Optimalisering av renningsprosessen basert på produkt- og prosessrelaterte forurensetninger for å øke produktkvaliteten og sikkerheten, f.eks., HCP, HCD, endotoxin.
- Definisjon og optimering av nøkkelparametere i en eller flere enhetsoperasjoner, inkludert cellelyse, tangensiell strømfiltasjon, resinskjerming, kromatografi, proteindenaturering og refolding, etc.
- Optimering av prosess med hensyn på kvalitet, utbytte, gjenopptak, kostnad og skalbarhet.
- Validering av nedstrømsreningsprosessen.
- Risikobasert vurdering av parameterområder og Design of Experiments (DoE) i prosessmodellering.
Tjenestedytninger
Standardiserte proteinklarening- eller plasmidplattformer baserer seg på flere grove reningssteg og mindre enn 4 kromatografisteg, inkludertfangst, mellomrening og polering.
| Tjenestedytninger |
Enhetsoperasjoner |
Parametre |
| Grovt rensning |
Sentrifugeringsprosess |
Rotasjonsfart, Tid |
| Høytrykks-homogenisering |
Total faststoffinnhold, Trykk, Sykler |
| Kontinuerlig baselysning |
Forholdet mellom opphengte celler og lysningsløsning, Lysningstid |
| Tangentiel strømfiltrering |
Membranmateriale og porstørrelse, Fødevarestrømshastighet Transmembrantrykk (TMP), Forholdet mellom filtratvolum og membranareal |
| Forklaring |
Type og konsentrasjon av forklaringsmiddel, Additiv, pH, Temperatur, Tid |
| Denaturering og refolding |
Inklusjonslegemeproten solubilisering |
Denaturantkonsentrasjon (f.eks., Ure, Guanidin HCl, Sterkt jonisk detergens), Detergenter (f.eks., Sodium dodecyl sulfat, SDS), Reduserende midler (f.eks., Dithiotreitol, DTT), Chelatormidler (Etylenediamintetraasettsyre, EDTA), Temperatur, Tid |
| Proteinrefolding |
Refoldingmetoder (uttynding, dialyse eller SEC-refolding), Protein-konsentrasjoner, Buffer, pH, Temperatur, Tid, Oksiderende og Reduserende Midler (f.eks., Glutatjon, GSH/Oksidert Glutatjon, GSSH, DTT/GSSH, Cystein/Cystin), Småmolekyladditive (L-arginin, Ure, Guanidin/HCl, og Vaskerstoffer) |
| Fangst, Mellemrening, og Polering |
AK (Affinitetskromatografi) |
Flere typer kromatografiresen/kolonne (f.eks., AK, IVE, HIE, SEC, RFA, MEM), Kolonnelengde og Diameter, Bufferkomposisjon, Injeksjonsvolum, Mobile Fasekomposisjon (Adsorbsjon og Desorbsjon), pH, Flytehastighet, Binding, Vasking, og Elusjonsbetingelser. |
| IVE (Anion- eller Kationvekslingskromatografi) |
| HIE (Hydrofob Interaksjonskromatografi) |
| Desalting og/eller størrelseseksklusjonskromatografi (SEC) |
| RFA (Reversert Fasekromatografi) |
| MEM, Blandet moduskromatografi |
Casestudie
TILFELLE 1
Vi er oppdraget til å utvikle og optimere nedstrømsreningsprosessen for å øke proteinreinheten fra 85% til 90% samtidig som vi reduserer antall kromatografi-trinn.
Yaohai levert en robust og skalbar reningsprosess med tre kromatografi-trinn for målprotein, et bakterielt allergi. Og den endelige reinheten nådde 95%.
TILFELLE 2
Yaohai ble pålagt av vår klient å optimere fjerningsprosessen av endotoksin for virusliknende partikkel (VLP)-vaksinen.
Vår gruppe utførte optimering av kromatografi-parametrene og beredde et medisinprodukt med reinhet på 98% og endotoksin-residu på 12,8EU/mg.
Vare erfaringer
- Vi har vært in involvert i utviklingen og produksjonen av ulike store molekyler, inkludert rekombinante subenhevacciner, VLP-er, hormoner (insulin, GLP-1, veksthormon), sitokin (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), vekstfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanokropper/enkeldomeneantikropp (sdAbs), enzymmer, osv.
Utstyr
Vi bruker bransjenøkkelen AKTA Pure, AKTA Avant og Preparative HPLC-systemer for å utføre ulike kromatografimetoder, herunder affinitet, jonoppveksling, hydrofob interaksjon, revers fase og størrelseseksklusjonskromatografi.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
