Според централната догма, гласник РНК (mRNA) е мост за пренос на генетски материјал од ДНК до протеини.
mRNA игра биолошка улога со кодирање на протеини in vivo, а зрелата mRNA во еукариотските организми се состои од пет компоненти: 5' Cap (структура на капа), 5' UTR (некодирачки регион), ORF (отворена рамка за читање), 3' UTR , и 3' polyA опашка (полиаденилат опашка).
Процесот на | Факултативна услуга | Детали за услугата | Период на испорака (ден) |
Дизајн и оптимизација на секвенца на mRNA | Дизајн и оптимизација на секвенци за кодирање | Порамнување на секвенцата на ЦДС Оптимизација на CDS кодони | 1 |
Дизајн и оптимизација на некодирачки секвенци | Дизајн и оптимизација на 5' UTR низа Дизајн и оптимизација на 3' UTR низа Дизајн и оптимизација на секвенца polyA | 1-2 |
5' UTR/3' UTR |
|
3' ПолиА опашка |
|
mRNA компоненти | Биолошки функции | Стратегии за оптимизација |
5' Капа | Заштитете ја мРНК од разградување со егзонуклеази и дејствувајте во склад со полиА опашката на 3'-крајот, полиА врзувачкиот протеин и протеинот на факторот за иницијација на транслација за да се иницира транслација на протеинот. | Природната структура Cap1 ги избегнува рецепторите за препознавање шаблони и на тој начин го намалува природниот имунолошки одговор, што може да се постигне со едностепено ко-транскрипциско ограничување или двостепено ензимско ограничување [видете мРНК ензимско ограничување и ко-транскрипција за детали]. |
5' UTR | 5' UTR може да се препознае преку рибозомите, да го регулира транслацијата на mRNA и да влијае на стабилноста на mRNA. | Содржи Козак секвенци без многу стабилна секундарна структура. Природните UTR на високо изразени гени се претпочитаат за mRNA за ин витро транскрипција (IVT) како што се α-глобин и β-глобин. |
ЦДС | Региони за кодирање на протеини и секвенци за кодирање на антигени, антитела или други функционални протеини. | Оптимизацијата на кодоните го зголемува нивото на транслација, забележувајќи дека одредени неоптимални кодони може да играат улога во преклопувањето на протеините. |
3' UTR | Регулира транслација и стабилност на mRNA. | Природни UTR на високо изразени гени се претпочитаат за IVT mRNA како што се α-глобин и β-глобин. |
3' полиА опашка | Регулирање на протеинската експресија и заштита на структурата на капачето од деградација. | Потребна е соодветна должина (100-150 bp); кодирањето на опашката polyA на плазмидот на шаблонот за транскрипција обезбедува подефинирана должина на опашката polyA. |
Повеќе извори на високо изразени природни и модифицирани UTR библиотеки; зрела стратегија за модификација на UTR;
Соработувајте со професионален тим за алгоритам за вештачка интелигенција за да ја завршите оптимизацијата на кодоните.
Додадете полиА секвенци според шаблоните на ДНК за попрецизно да ја контролирате должината на mRNA.
Постигнете ефикасна експресија на mRNA со ниска имуногеност.
Дизајн на секвенца на mRNA со двоен известувач: mCherry-eGFP mRNA
Услугата mRNA на Yaohai Bio-Pharma продолжува да се надградува со дизајнирање и оптимизација на двојна известувачка генска тандемска секвенца, со што се постигнува ко-изразување на двојни гени.
Со користење на конвенционален реагенс за трансфекција, двојната генска тандем секвенца mCherry-eGFP mRNA се трансфицира во 293T клетки, а два флуоресцентни сигнали на mCherry (црвено) и зајакнат зелен флуоресцентен протеин (eGFP) се детектираат со истовремена експресија по 48 часа, и графиконот е означен со жолто.
Експресија на mCherry-eGFP mRNA во 293T клетка