Затворањето на 5'-крајот е суштинска модификација на mRNA. mRNA со капа структури, особено Cap1 структури, го олеснуваат мРНК избегнувањето на вродените имунолошки одговори in vivo, што резултира со ефикасен превод на протеини.
Ензимското покривање (метод во два чекора) е конвенционален метод на затварање на mRNA, сличен на процесот на покривање кај еукариотските организми. Под дејство на низа ензими, 7-метилгуанин (m7G) е поврзан со 5'-крајот на mRNA преку 5'-5' трифосфатна врска и се подложува на модификација на метилација за да се формира структурата на капа Капа 1 (m7GpppN).
Дијаграм на формирање на природна структура на капа
Текот на реакцијата на ензимско покривање е како што следува:
Линеаризираната плазмидна ДНК се користи како шаблон за ин витро транскрипција (IVT) во присуство на Т7 полимераза, а mRNA со структура на 5' крајна капа се формира по едностепено прочистување со користење на ензимот за покривање на вакцинија и 2'-O -метилтрансфераза.
Детали за услуги
Факултативна услуга | Детали за услугата | Период на испорака (ден) |
mRNA ензимско покривање | Реакција на ензимско покривање | 1 |
Оптимизација на реакцијата за покривање - опционално | Дизајн и оптимизација на компонентата за реакција | 3 7 ~ |
Нашите карактеристики
- Дизајн и оптимизација на компонентата за реакција на капакот
Компонентата на реакцијата за покривање е оптимизирана, а производството на транскрипт на mRNA е значително зголемено.
- Ин витро верификација на изразување
Затворената мРНК се трансфицира во 293Т клетки и може да се открие експресијата на целниот протеин.
Преку строга контрола на RNaseson експерименталната средина и потрошен материјал, ефикасно се спречува деградацијата на mRNA.
студија на случај
Платформата mRNA на Yaohai Bio-Pharma има изградено совршен процес на реакција на ограничување.
За eGFP mRNA, mRNA пред-производ подготвен со ензимско покривање, може да се забележи сигнал за флуоресценција eGFP (зелена флуоресценција) на високо ниво по трансфекција на 293T клетки во текот на 24 часа, што е откриено со Western Blot (WB), што покажува дека Зелен флуоресцентен протеин зајакнат со целните протеини (eGFP) може ефикасно да се изрази ин витро.
Експресија на ензимска затворена eGFP mRNA во 293T клетка
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
