Во процесот на приготвување на транскрипција во vitro (IVT) mRNA, се потребен линеаризиран плазмиден DNA како транскрипцион шаблон за IVT со помош на T7 RNA полимераза. Висококвалитетниот плазмиден DNA е од клучно значење за транскрипцијата во vitro.
Базирано на зрелата платформа за услугите по припрема на плазмиди, Yaohai Bio-Pharma може да предложи услуга за припрема на линеаризиран плазмиден DNA со висока чистота и стандард за постигнување на ефикасна транскрипција на IVT.
Процес | Опционална Услуга | Детали за услугата | Период на Издржувачење (работен ден) |
Припрема на циркуларен плазмид | Синтеза на ген | Синтеза на ген (Трећа страна) | 7-10 |
Амплификација на плазмид | Амплификација на плазмид | 2 | |
Екстракција на плазмид | |||
Припрема на линеаризиран плазмид | Линеаризација и чистење на плазмид | Линеаризација на плазмид | 1 |
Чистење на ДНК при линеаризација | |||
Контрола на квалитетот на плазмидна ДНК | Концентрација чистота | Ултравиолет (UV) спектрофотометрија | 1-2 |
Плаzmид конформација | Агарозна гел електрофореза (AGE) | ||
Капиларна електрофореза (CE)-Опционално | |||
Плаzmид идентификација | Идентификација со рестрикциона ензима/AGE |
Гибела избор на методите за линеаризација
Оптимизација на методите за екстракција и чистење на ДНК за да се постигнат високи проценти на опорабување.
Строги стандарди на контрола на процесот, со процент на суперхелична конформација на плазмидни примероци за истражување поголем од 80%.
Високи стандарди и ефикасни услуги за припрема и контрола на квалитетот на плазмиди за да се задоволат експерименталните потреби.
Земајќи го катологот mRNA_luciferase производ на Yaohai Bio-Pharma како пример, плазмидниот примерок (исследувачкиот степен) има суперхелична пропорција поголема од 90%, линеаризација блиска до 100%, и последна транскрипција до 1:200 (линеаризирана плазмидна ДНК:мРНК).
МРНК_лукиферас која се добива со користење на линеаризиран плазмид како темплат се трансферира во 293T клетки, и активноста на ензим-субстрат реакцијата се оценува 24 часа по трансферот.
Јасен сигнал на силна активност на луцифераза може да се засече, т.е., белчина луцифераза се изразува ефикасно, што предлага дека чистотата на транскрипциониот темплет може потполно да задоволи заhtевите за приготвување на висококвалитетнa мРНК.
Тест за однос на суперспирални плазмиди
Потврда на изразувањето на мРНК луцифераза In Vitro