Споредено со двостепеното ензимско капирање, методот на едностепено ко-транскрипциона капирање може значајно да го сmanува процесот. Овој метод е резултат-ориентиран и вклучува додавање на кап аналоги во реакцијата на транскрипција во vitro (IVT). Кап аналогите можат да се воведат од самото почеток на транскрипцијата, а мРНКа со кап структура се добива при завршувањето на транскрипцијата. Со текот на моментовите кап аналоги од третата генерација можат да избегнуваат обратно капирање и директно да додадат Cap 1 структура на транскрипциониот продукт.
За размислување за имуногеноста на mRNA во живо и ефикасноста на преводот, процесот на IVT често користи одредени видови модифицирани НТП-и, а обичните модифицирани нуклеотиди се псеудоуридин (Ψ), N1-метил-псеудоуридин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5mC).
Слика: Дијаграм на ко-транскрипционата реакција на mRNA и капирање
Услуга |
Детали за услугата |
Период на Издржувачење (работен ден) |
Ко-транскрипционо капирање |
Преобразба во vitro (Чист кап аналог) | 1-2 |
Модификација на нуклеотидите (Ψ/Н1Ψ/5мЦ) | ||
Отстранување на ДНК темплет (ДНаза I) | ||
Оптимизација на условите за IVT - опционално |
Дизајн и оптимизација на реактивните компоненти | 3-7 |
Многу опционални стратегии за модификација на нуклеотидите можат да подобрат изразувањето на протеините.
Достигнете висок ратио на транскрипција и висока ефикасност на капирање.
Достигнете капирачка стапка од повеќе од 95%.
Превенција на деградацијата на mRNA ефективно со строга контрола на RNase во експерименталната средина и потрошувачки материјали.
Yaohai Bio-Pharma ја создаде зрелата платформа за сопствено капирање, користејќи чисти кап аналоги за директно додавање на Cap1 структура, при што се избегнува обратно капирање. Потоа, со стандардизирана предобработка на примероци и детекција со капиларна електрофореза (CE), капирачката стапка на mRNA на зголемената зелена флуоресцентна белчинка (eGFP) може да достигне повеќе од 95%.
ефикасноста на капирање на еГФП мРНК е повеќе од 95%
ЕГФП мРНК и мЧерри мРНК приготвените со ко-транскрипционално капирање се трансфектираат во клетки 293T, ресpectively, и се набљудува јак флуоресцентен сигнал по 48 часа, што sugerira дека мРНК е ефикасно изразена во клетките 293T.
Израз на еГФП мРНК и мЧерри мРНК во клетките 293T