Во однос на сериската подготовка на РНК прекурсори, најчесто користен метод е ин витро транскрипција (IVT). Реакцијата IVT користи линеаризирана плазмидна ДНК која го содржи промоторот Т7 како шаблон и синтетизира РНК прекурсор со нуклеозидни трифосфати (НТП) како супстрат во присуство на Т7 РНК полимераза.
Ин витро методите на цикализација вклучуваат хемиска лигатура, ензимска лигатура и пермутиран интрон-ексон (PIE). Хемиската и ензимската лигатура се погодни за цикализација на пократки РНК. Кога фрагментот е поголем од 100 nt, стапката на циклизација значително ќе се намали. Спротивно на тоа, методот на нуклеаза базиран на системот PIE може да постигне цикализација на секвенци од 8 kb.
Под катализа на гванозин трифосфат (GTP), структурата на PIE се подложува на циклизирање на екстра-интронските секвенци. Во комбинација со разумна стратегија за зголемување на стапката на циклизација, Yaohai Bio-Pharma може да постигне циклизација до секвенци од 4 kb, со ефикасност на циклизација од повеќе од 80%.
Ин витро циклизационата реакција на РНК тече на следниов начин:
Претходникот на РНК се синтетизира со ин витро транскрипција, а PIE компонентата го комплетира самоспојувањето под катализа на GTP за да формира circRNA.
Детали за услуги
| Процесот на | Детали за услугата | Период на испорака (работен ден) |
| Ин витро транскрипција и циркулација | Потврда на системот за реакција | 1-2 |
| Ин витро реакции на транскрипција и цикализација |
| RNase R дигестија |
| Оптимизација на реакцијата | Состав на реакција, оптимизација на време | 2-5 |
Нашите карактеристики
- Ригорозен тест дизајн и оптимизација
Може да се постигне до 4 kb цикализација на РНК.
- Висока ефикасност на циклизација
Стапката на цикализација од повеќе од 80% може да се постигне преку стратегија за рационална оптимизација на низата.
Преку строга контрола на RNase во експерименталната средина и потрошен материјал, ефикасно се спречува деградацијата на РНК.
студија на случај
Ин витро цикализација и збогатување на circRNA
Врз основа на системот PIE, Yaohai Bio-Pharma ја оптимизира секвенцата на circRNA, со стапка на цикализација од повеќе од 80% со електрофореза на агарозен гел (AGE). Со користење на RNase R за збогатување на циркРНК, резултатите од електрофорезата на Е-гел покажуваат дека линеарната РНК прекурсор се вари, а по понатамошното прочистување, најголемиот дел од пробиената цирцРНК може да се отстрани. Растворот за прочистување е само-развиен од Yaohai Bio-Pharma.
Ин витро циркулација и збогатување на circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
