За претприемниот приготовување на RNA предшественици, често користена метода е транскрипцијата во vitro (IVT). IVT реакцијата користи линеаризиран плазмиден DNA што содржи T7 промотор како темплат и синтезира RNA предшественик со нуклеозид трифосфати (NTPs) како субстрат во присуство на T7 RNA полимераза.
Методите за циклизација in vitro вклучуваат хемиска лигација, ензимска лигација и метод на пермутирана интрон-екзон (PIE) структура. Хемиската лигација и ензимската лигација се прилагодени за циклизација на кратки РНК молекули. Кога фрагментот е поголем од 100 нт, ратата на циклизација ќе се намали значително. Наспротив, методот со нуклеаза baziran на системот PIE може да постиgne циклизација на секвенци од 8 кб.
Под каталозата на гуанозин трифосфат (GTP), PIE структурата ја извршува циклизацијата на екстра-интрон секвенци. Комбинирано со стратегија за зголемување на ратата на циклизација, Yaohai Bio-Pharma може да постиgne циклизација на секвенци до 4 кб, со ефикасност на циклизација повеќе од 80%.
Реакцијата на циклизација на РНК in vitro протича како што следи:
Претходникот на РНК се синтезира преку транскрипција in vitro, а компонентот PIE завршува со самосплитирање под каталозата на GTP за да формира circRNA.
Детали за Услугите
| Процес |
Детали за услугата |
Период на Издржувачење (работен ден) |
| Транскрипција и циркулација во vitro |
Потврда на реакциониот систем |
1-2 |
| Реакции на Ин Витро Транскрипција и Циклирање |
| Дигестација со RNase R |
| Оптимизација на реакцијата |
Состав на Реакцијата, Оптимизација на Времетраењето |
2-5 |
Нашите карактеристики
- Строга Тест Дизајн и Оптимизација
Може да се постигне циклирање на РНК до 4 кб.
- Висока ефикасност на циклирањето
Преку рационална оптимизација на низата може да се постигне стапка на циклирање од повеќе од 80%.
Преку строга контрола на RNase-овите во експерименталната средина и конзумативите, ефективно се спречува деградацијата на RNA.
Студија на случај
Циклизација и обогатување на circRNA in vitro
Базирано на системот PIE, Yaohai Bio-Pharma го оптимизирало низата на circRNA, со процент на циклизација поголем од 80% според агарозна гел електрофореза (AGE). Користејќи RNase R за обогатување на circRNA, резултатите од E-gel електрофорезата покажуваат дека линеарниот RNA предшлесок е дијетилан, а по надворешно чистење, повеќето од цепените circRNA можат да бидат отстранети. Решението за чистење е самостојно развиено од Yaohai Bio-Pharma.
Циркулација и обогатување на circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
