Порачка синтеза на saRNA
Само-умножувачкото mRNA (saRNA), познато и како replicon RNA, кодира секвенци на in vitro транскрипција (IVT) mRNA и гени на вируски репликаси кои произлегуваат од алфавируси или флавивируси. Вируските гени за репликација овозможуваат само-умножувањето на mRNA-то, што доводи до зголемена експресија на протеин и минимална потребна доза на RNA според не-умножувачките mRNAs. Од друг аспект, saRNA е относно голем молекул (повеќе од 14 кб).
Yaohai Bio-Pharma ја основа наборот од mRNA синтезни технологии за да овозможи нереплицираща mRNA и самореплицираща mRNA (1000 nt~14000 nt), како што се дизајн и оптимизација на низ, IVT, чистење, лиофилезација и енкапсулација во липидни наночестички системи (LNP). Сите производи се освободуваат под строги стандарди на контрола на квалитет.
Сл.1 Структурни карактеристики на IVT mRNAs: Конвенционална, Кружна и Самореплицираща mRNA.
Низовни карактеристики на самореплицираща mRNA
РНК со самостојна амплификација содржи четири неструктурни протеини (означени како nsP1, nsP2, nsP3 и nsP4), кои произлегуваат од алфавируси, венециските еквини енцефалитички вирус (VEEV). Сред тие, nsP1 ја проявува двојната ензимска активност GTase и N7MTase, додека nsP2 претставува RTPase активност, што е кључно за капирањето на IVT мРНК за да се генерира Cap 0 структура. Понатаму, nsP2 служи како протеаза и хеликаза, што олеснува сложената обработка на целокупниот nsP комплекс. Точната функција на nsP3 уште уникако не е раскрита, но тој се ангажира во взаемодействија со различни протеини на домашната клетка, што придонесува за намалување на противвируската одговор на домаќинот.
Регионот на подгеномскиот продуцент (SGP) на алфавируса се наоѓа пред генот на интерес (GOI). Елементот SGP олеснува започнувањето на транскриpcion на GOI со збунување на читањето на секвенцата што кодира вируските протеини nsP.
Сл.2. Синтеза и клеточни тестови на eGFP saRNA на платформата RNASci на Yaohai Bio-Pharma.
Прилагодени решенија на saRNA
Протоколот за синтеза на saRNA е сличен на mRNA: Порачка синтеза на mRNA
- Дизајн на низата
- Припрема на плазмиден темплет
- транскрипција во vitro (IVT)
- ензимска капирање на mRNA
- ко-транскрипциона капирање на mRNA
- чистење на mRNA
- лиофилезација на mRNA
- Енкапсулација LNP
- Аналитички анализи и тестови
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
