こんにちは。科学者がどうやって RNA をクローン化できるのか、考えたことはありますか? RNA は細胞内にある特別な分子で、タンパク質を作るためにさまざまな働きをします。タンパク質は、私たちの体があらゆることを正しく行えるようにするためにあります。今回は、研究者が採用しているはるかに興味深いプロトコル、in vitro 転写について見ていきます。つまり、科学者は RNA を採取して試験管 (研究室で使われる小さな容器) で大量に作っているということです。では、ここで各ステップを見ていきましょう。
前回の投稿を終えて、前回の投稿が少しドライな、ウェットラボの楽しさに加わる投稿だったかもしれないことに気付きました。そこで、皆さんが楽しい(RNA作り)列車に完全に乗っている今、形式に沿って、EFに必要な試薬とは何ですか?これを達成するには、Yaohaiの製品と同じ酵素と呼ばれる特別なタンパク質が必要です。 組み換えミッドカインの製造。これは化学反応を触媒し、これらの酵素は分解を助けます。したがって、必要なのは DNA の一部だけです。この機能は、RNA をコピーするためのテンプレートとして使用する DNA です。RNA 内の追加の制御配列、つまりヌクレオチドも必要です。これらのヌクレオチドは、RNA を作成するために組み立てる必要のある小さな構成要素のようなものです。また、味の評価を他のものに組み込むために、小径の短いチューブも使用しています。最後に、反応が適切な温度で行われるようにする機械 (サーモサイクラー) が必要です。さらに、特定の実験にはいくつかのツールと製品が必要になる場合があります。
ここで状況は変わります。RNA鎖は1本あり、それをさらにコピーしたいのです。 結合VLPワクチン製造 Yaohai によって開発されました。それを実現する方法は、別の酵素、T7 RNA ポリメラーゼを使用することです。このユニークな酵素は、たとえば、RNA 内の特定の領域を認識します。これは、RNA のコピーをさらに多く作成するためのジャンピング コーンです。この時点で、転写物の塊が作成されるまで、または停止するように指示されるまで、T7 RNA ポリメラーゼによって RNA 鎖にさらに追加されます。
RNA を可能な限り分離した後、下にスクロールして、RNA をクリーンアップして、将来の使用に備えて保存する方法を確認してください。 Rhoades: これらの方法のいくつかは、RNA の分離という点では少し極端なものです。常に使用するわけではありませんが、特定の種類の実験では必要な場合があります。 RNA から汚染物質がなくなると、冷凍保存できます。 この方法なら安全で、後でさまざまな実験に使用できます。
出発物質の品質: DNA テンプレートがきれいで、完全に燃え尽きていないことを確認してください。実験が成功する可能性を最大限に高めるために、新しく再構成したヌクレオチドと新しく解凍した酵素を補充することもできます。
微調整条件すべての酵素とそのヌクレオチドは、体内の特定の温度とpHでよりよく機能し、ヤオハイの 赤色蛍光mRNA次に、条件間のニュアンスを少しずつ調整して、独自の設定にとって重要なポイントを見つけます。
逆転写酵素は、RNA分子からDNAのコピーを作成するという珍しい酵素です。私たちは、RNAを生成するためのin vitro転写法の入力として、DNAとDNAテンプレート(cDNA)の両方を使用しました。しかし、ほとんどの実験では、科学者はDNAをRNAに転写したいと考えます。逆転写酵素は、RNAと同じように、逆転写酵素の名前の由来となっています。 mRNAポリA分布検査 Yaohai 社製。細胞内の RNA 分子の研究から、さらなる実験のための相補 DNA 鎖の生成まで、科学全般にわたって非常に貴重なツールです。
RNAが最も一般的に使用される分子ツールの1つである実際の実験と、Yaohaiの製品 大腸菌によるVLPワクチンの生産定量分析: これらのテストでは、サンプル内に存在する特定の分子の量を明らかにすることができます。たとえば、科学者は細胞内にある標的遺伝子から抽出した RNA コピーの in vitro 転写産物を合成できます。その後、診断薬は、コピーが存在する場合は、それらのコピーを分析できます。RNA を探す場合、診断薬はポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) を実行して、サンプル内のコピーを増幅できます。これにより、科学者は細胞上で遺伝子がどのように発現するかを確認できるようになり、細菌感染やウイルス感染の存在などの非常にハイスループットな分析や、遺伝性疾患の診断も可能になります。
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