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Protocollo di trascrizione in vitro

Ciao. Ti sei mai chiesto come gli scienziati possano clonare un RNA? L'RNA è questa molecola speciale che troviamo nelle nostre cellule e che fa un sacco di cose per creare proteine, e le proteine ​​sono lì affinché il nostro corpo possa fare tutte le cose giuste. In questa puntata, faremo una passeggiata attraverso il protocollo molto più curioso impiegato dai ricercatori: la trascrizione in vitro. E tutto ciò significa che gli scienziati stanno prendendo l'RNA e ne stanno producendo molto in una provetta (che è questo piccolo barattolo che usano i laboratori), quindi entriamo in ogni passaggio qui. 

Dopo aver terminato il mio post precedente, mi sono reso conto che l'ultimo potrebbe essere stato un po' noioso, tipo "vieni a divertirti nel laboratorio bagnato"; quindi, per restare in tema ora che sei davvero sul treno del divertimento (sic, la produzione di RNA): quali reagenti ec saranno necessari per il tuo EF? Per farlo, avremo bisogno di proteine ​​speciali chiamate enzimi, identiche al prodotto di Yaohai Produzione di Midkine ricombinante. Catalizza le reazioni chimiche, questi enzimi aiutano nella scomposizione. Quindi ora abbiamo solo bisogno del nostro pezzetto di DNA. Questa funzione è il DNA che usiamo come modello da copiare per il nostro RNA. Sono necessarie anche sequenze regolatrici aggiuntive nell'RNA, vale a dire nucleotidi. Questi nucleotidi sono come piccoli blocchi di costruzione che devono essere assemblati per creare l'RNA. Stiamo anche utilizzando tubi corti di piccolo diametro per impastare la valutazione del gusto in altro. Infine, abbiamo bisogno di una macchina (un termociclatore) che assicuri che le nostre reazioni siano alla giusta temperatura. Inoltre, potremmo aver bisogno di alcuni strumenti e prodotti per determinati esperimenti.

Massimizzazione della resa e della purezza nelle procedure di trascrizione in vitro

Quindi qui le cose divergono, abbiamo un filamento di RNA e ora vorremmo averne più copie, anche il Produzione di vaccini VLP coniugati sviluppato da Yaohai. Il modo per ottenere l'uso di un altro enzima; T7 RNA polimerasi. Questo enzima unico, ad esempio, riconosce aree specifiche all'interno dell'RNA. un cono saltante per fare molte più copie di RNA nel procedimento. A questo punto, ne verrà aggiunto di più al filamento di RNA dalla T7 RNA polimerasi finché non sarà stata creata una massa di trascrizione, o finché non le diremo di fermarsi. 

Dopo aver isolato il più possibile l'RNA, scorri più in basso per vedere come ripulire e conservare l'RNA per un uso futuro. Rhoades: Alcuni di questi metodi sono un po' più estremi in termini di isolamento dell'RNA: non lo useresti sempre, ma a volte per certi tipi di esperimenti è necessario. Una volta che il nostro RNA è privo di contaminanti, può essere conservato congelato. In questo modo è sicuro e possiamo quindi utilizzarlo in seguito nei vari esperimenti.

Perché scegliere il protocollo di trascrizione in vitro Yaohai?

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