Championing Reporter RNA Modification Methods

Kada birate koja je metoda modifikacije reporter mRNA poželjnija, nema konačnog odgovora jer svaka metoda i svaki reporterski gen ima svoje prednosti i primjenjive scenarije. Evo nekih uobičajenih metoda modifikacije mRNA i reporterskih gena, zajedno s njihovim karakteristikama i prikladnošću.

Metode modifikacije mRNA

Metilacija:

1. m6A: Povezano sa stabilnošću mRNA, spajanjem, prevođenjem i obradom miRNA. Izazovi otkrivanja uključuju odabir i lokalizaciju protutijela.
2. 5' Cap Nm: Poboljšava stabilnost, spajanje, poliadenilaciju i nuklearni izvoz. Pomaže u razlikovanju vlastite RNA od strane RNA.
3. Pseudouridilacija: Mijenja kodone, povećava stabilnost i reagira na stres. Kataliziran pseudouridin sintazama.

Uvođenje neprirodnih nukleotida:

1. Uvedeno tijekom transkripcije s dvostrukom strategijom kemijske modifikacije. Povećava stabilnost, učinkovitost i ekspresiju proteina.

Reporterski geni

1. Gen za zeleni fluorescentni protein (GFP): Prednosti: Lako se detektira, stabilna svojstva fluorescencije, netoksičan za stanice, pogodan za snimanje živih stanica. Nedostaci: Ograničeni intenzitet fluorescencije.
2. Poboljšani zeleni fluorescentni protein (eGFP): Prednosti: Preko 6 puta svjetliji od divljeg tipa GFP, što ga čini prikladnijim kao reporter gen za proučavanje ekspresije gena, regulacije, stanične diferencijacije i lokalizacije proteina i transporta unutar organizama.
3. Crveni fluorescentni proteini (npr. mCherry): Prednosti: Duže valne duljine ekscitacije i emisije, što rezultira nižom pozadinom tijekom intracelularnog snimanja, izvrsnom svjetlinom fluorescencije i fotostabilnošću te manjom staničnom toksičnošću. Nedostaci: Možda se neće koristiti tako često kao GFP u određenim eksperimentalnim uvjetima.
4. Luciferaza krijesnica: Prednosti: U prisutnosti ATP-a, iona magnezija i kisika, može katalizirati oksidaciju luciferina u oksiluciferin, emitirajući bioluminiscenciju. Pogodan je za upotrebu kao kontrola za proučavanje učinkovitosti translacije ciljnih gena u stanicama sisavaca, stanične održivosti i in vivo slikovnih testova.

Zaključak

Prilikom odabira koja je metoda modifikacija reporterske mRNA poželjnija, to ovisi o specifičnim eksperimentalnim ciljevima, pozadini istraživanja i eksperimentalnim uvjetima. Na primjer, ako je potrebna visoka osjetljivost, eGFP bi mogao biti bolji izbor. Ako je potrebno snimanje na dužim valnim duljinama za smanjenje pozadinskih smetnji, crveni fluorescentni proteini poput mCherry mogu biti prikladniji. Dodatno, na temelju specifičnih modifikacijskih potreba mRNA (npr. povećanje stabilnosti, poboljšanje učinkovitosti prevođenja), može se odabrati odgovarajuća modifikacijska metoda.

Kao prvi i najveći mikrobni biološki CRDMO u Velikoj Kini, Yaohai Bio-Pharma nudi end-to-end prilagođena rješenja na jednom mjestu ili samostalne usluge u rasponu od sinteze RNK, sojevog inženjeringa i konstrukcije, uzvodnog i nizvodnog razvoja procesa, do GMP-a ili ne - Proizvodnja ljekovitih tvari na razini GMP-a i usluge punjenja i dorade za različite modalitete, kao što su mRNA, circRNA, plazmidna RNA, rekombinantne proteine, peptide, enzime, protutijela s jednom domenom i VLP-ove za ljudsku i veterinarsku upotrebu.

Yaohai Bio-Pharma također aktivno traži institucionalne ili pojedinačne globalne partnere i nudi najkonkurentniju naknadu u industriji. Ukoliko imate pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]