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Desarrollo de plásmidos

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Desarrollo de plásmidos

ADN plásmido, como in vitro plantilla de transcripción (IVT), es una materia prima importante para la fabricación de ARNm. Alto rendimiento, alta purificación y alta recuperación de ADN plasmídico es el principal objetivo durante el desarrollo del proceso plasmídico.

Yaohai Bio-Pharma proporciona una solución integral para el desarrollo de plásmidos, incluido el desarrollo de procesos ascendentes (fermentación), descendentes (purificación), la caracterización y validación de procesos. Tenemos amplia experiencia mejorando el rendimiento de plásmidos y aislándolos de matrices complejas mediante el desarrollo y optimización de procesos de fermentación, purificación y eliminación de impurezas. 

Detalle de Servicios

El bioproceso básico para la fabricación de plásmidos incluye: Escherichia coli (E. coli) fermentación, recolección celular y lisis alcalina, clarificación, concentración, proceso de cromatografía de tres pasos (captura, purificación intermedia y pulido) y concentración.

Detalle de Servicios Operaciones unitarias parámetros
E. coli fermentación
Matraz de agitar Composiciones de medios, antibióticos, volumen de inóculo, temperatura de crecimiento, etc.

Fermentador (7 litros)

Antibiótico, volumen de inóculo, temperatura de crecimiento, pH, oxígeno disuelto (OD), modo de alimentación (p. ej., alimentación por lotes), medio de alimentación, tiempo de fermentación, etc.

Cosecha celular Microfiltración Standard E. coli proceso de cosecha
Lisis celular Resuspensión celular, lisis alcalina, neutralización. Relación de álcali, tiempo de lisis
Aclaración Filtración Filtración cruda, 20 µm y un tren de filtración de 5 µm (preferido)
Concentración Ultrafiltración, filtración de flujo tangencial. Tamaño de poro (o NMWC), presión transmembrana (TMP), flujo, relación entre volumen de filtrado y área de membrana  
Cromatografía de tres pasos Cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) o cromatografía de filtración en gel (GFC)  Longitud y diámetro de la columna, composición del tampón, volumen de inyección, composición de la fase móvil (adsorción y desorción), pH, caudal, condiciones de equilibrio, unión, lavado y elución.
Cromatografía de afinidad (AF)
Cromatografía de intercambio aniónico (AEX)
Concentración Ultrafiltración, filtración de flujo tangencial. Tamaño de poro (o NMWC), presión transmembrana (TMP), flujo, relación entre volumen de filtrado y área de membrana 
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