ADN plásmido, como in vitro plantilla de transcripción (IVT), es una materia prima importante para la fabricación de ARNm. Alto rendimiento, alta purificación y alta recuperación de ADN plasmídico es el principal objetivo durante el desarrollo del proceso plasmídico.
Yaohai Bio-Pharma proporciona una solución integral para el desarrollo de plásmidos, incluido el desarrollo de procesos ascendentes (fermentación), descendentes (purificación), la caracterización y validación de procesos. Tenemos amplia experiencia mejorando el rendimiento de plásmidos y aislándolos de matrices complejas mediante el desarrollo y optimización de procesos de fermentación, purificación y eliminación de impurezas.
El bioproceso básico para la fabricación de plásmidos incluye: Escherichia coli (E. coli) fermentación, recolección celular y lisis alcalina, clarificación, concentración, proceso de cromatografía de tres pasos (captura, purificación intermedia y pulido) y concentración.
Detalle de Servicios | Operaciones unitarias | parámetros |
E. coli fermentación |
Matraz de agitar | Composiciones de medios, antibióticos, volumen de inóculo, temperatura de crecimiento, etc. |
Fermentador (7 litros) |
Antibiótico, volumen de inóculo, temperatura de crecimiento, pH, oxígeno disuelto (OD), modo de alimentación (p. ej., alimentación por lotes), medio de alimentación, tiempo de fermentación, etc. |
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Cosecha celular | Microfiltración | Standard E. coli proceso de cosecha |
Lisis celular | Resuspensión celular, lisis alcalina, neutralización. | Relación de álcali, tiempo de lisis |
Aclaración | Filtración | Filtración cruda, 20 µm y un tren de filtración de 5 µm (preferido) |
Concentración | Ultrafiltración, filtración de flujo tangencial. | Tamaño de poro (o NMWC), presión transmembrana (TMP), flujo, relación entre volumen de filtrado y área de membrana |
Cromatografía de tres pasos | Cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) o cromatografía de filtración en gel (GFC) | Longitud y diámetro de la columna, composición del tampón, volumen de inyección, composición de la fase móvil (adsorción y desorción), pH, caudal, condiciones de equilibrio, unión, lavado y elución. |
Cromatografía de afinidad (AF) | ||
Cromatografía de intercambio aniónico (AEX) | ||
Concentración | Ultrafiltración, filtración de flujo tangencial. | Tamaño de poro (o NMWC), presión transmembrana (TMP), flujo, relación entre volumen de filtrado y área de membrana |
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