Síntesis personalizada de saRNA
El ARN mensajero autoamplificante (saRNA), también conocido como ARN replicón, codifica secuencias de ARN mensajero transcribidas in vitro (IVT) y genes de replicasa viral derivados de alfa virus o flavivirus. Los genes de replicasa viral permiten la autoamplificación del ARNm, lo que resulta en una mayor expresión de proteínas y una dosis mínima de ARN requerida en comparación con los ARNm no amplificantes. Otro aspecto es que el saRNA es una molécula relativamente grande (más de 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma ha desarrollado un conjunto de tecnologías de síntesis de ARNm para proporcionar ARNm no amplificante y ARNm autoamplificante (1000 nt~14000 nt), como diseño y optimización de secuencias, IVT, purificación, liofilización y encapsulación en nanopartículas lipídicas (LNP). Todos los productos se liberan bajo estrictos estándares de control de calidad.
Fig.1 Características estructurales de los ARNm IVT: Convencional, Circular y Autoamplificante.
Características de Secuencia del ARNm Autoamplificante
El ARN autoamplificante consta de cuatro proteínas no estructurales (designadas como nsP1, nsP2, nsP3 y nsP4), que se derivan de los alfavirus, virus del encefalitis equina venezolana (VEEV). Entre estas, nsP1 exhibe dos actividades enzimáticas, a saber, GTasa y N7MTasa, mientras que nsP2 posee actividad RTPasa, esencial para poner el IVT mRNA en forma de Cap 0. Además, nsP2 actúa como una proteasa y helicasa, facilitando el procesamiento complejo del conjunto nsP entero. La función precisa de nsP3 sigue siendo desconocida, aunque interactúa con diversas proteínas de la célula huésped, contribuyendo a la atenuación de la respuesta antiviral desplegada por el huésped.
Una región promotora subgenómica de alfaviruses (SGP) se encuentra antes del gen de interés (GOI). El elemento SGP facilita el inicio de la transcripción de GOI al omitir la lectura de la secuencia que codifica las proteínas nsP virales.
Fig.2 Síntesis y ensayos celulares del saRNA de eGFP de la plataforma RNASci de Yaohai Bio-Pharma.
Soluciones Personalizadas de saRNA
El protocolo de síntesis de saRNA es similar al de mRNA: Síntesis de ARNm a medida
- Diseño de Secuencia
- Preparación de plantilla de plásmido
- transcripción in vitro (IVT)
- tapado enzimático de ARNm
- tapado co-transcripcional de ARNm
- purificación de ARNm
- liofilización de ARNm
- Encapsulamiento en LNP
- Análisis y pruebas
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