Yaohai Bio-Pharma berei circRNA voor gebaseer op die PIE-stelsel (belyning van eksons en introne), wat staatmaak op die selfsplywingsfunksie van tipe I-introne om RNA-sirklisering te bewerkstellig. Die PIE-struktuur is ontwerp met behulp van die T4 td geen of fishy tRNA voorloper geen, en die rangskikking is soos volg:
Die RNA-intron en ondersteunende eksonfragment word in twee dele verdeel (5'-terminaal en 3'-terminaal), waar die 5'-terminaalvolgorde na die stert van die teikenvolgorde oorgedra word, die 3'-terminaalvolgorde word in die voorkant van die teikenvolgorde, en die teikengeenvolgorde word in die middel ingevoeg.
Onder die katalise van GTP lei die PIE-struktuur tot die siklisering van rye anders as introne. Gekombineer met 'n redelike verbeteringstrategie van sikliseringskoers, kan Yaohai Bio-Pharma siklisering van reekse tot 4 kb bereik met 'n sikliseringskoers van meer as 80%.
Figuur 1. In vitro sirkulasie van sirRNA gebaseer op die PIE sisteem
Dienste Besonderhede
| proses |
Opsionele diens |
Diensbesonderhede |
Afleweringstydperk (werkdag) |
| circRNA volgorde ontwerp en optimalisering |
Ontwerp en optimalisering van koderingsreekse |
CDS volgorde belyning
CDS kodon optimalisering
|
1 |
| Ontwerp en optimalisering van nie-koderende rye |
Intron en ekson volgorde ontwerp en optimalisering
Homoloë armvolgorde ontwerp en optimalisering
Spacer volgorde ontwerp en optimalisering
|
1-2 |
Algemene strategieë vir mRNA-volgordeontwerp
| CircRNA-komponente |
Biologiese funksies |
Optimaliseringstrategieë |
| Twee-terminale intron- en eksonvolgorde |
GTP-gekataliseerde intron-selfsplyting vir siklisering van rye buite die intron. |
Ontwerp volgens die T4 td geen of visolie tRNA voorloper geen. |
| Kodering |
IRES |
Interne ribosoomherkenningsplek wat die vertaling van sirRNA reguleer. |
Sifting van interne ribosoomintreeplek (IRES) volgordes van verskillende virale bronne, bv. EMCV, CVB3 bronne. |
| CDS |
Proteïenkoderende streke, volgordes wat vir antigene, teenliggaampies of ander funksionele proteïene kodeer. |
Kodonoptimering verhoog die vlak van vertaling; sekere nie-optimale kodons kan 'n rol in proteïenvou speel. |
| Nie-kodering |
Nie-koderende rye |
Teiken miRNA's of proteïene om geen- of proteïenregulering uit te oefen. |
Om spesifieke bindingsplekke vir miRNA's of proteïene te rig, kan die volgordes van die bindingsplek herhaal. |
Ons funksies
- Geoptimaliseerde PIE-siklussiestelsel Kombinasie met redelike optimaliseringstrategieë om 'n sikliseringskoers van meer as 80% te bereik;
- Voorpunt-CDS-optimeringspan Samewerking met professionele KI-algoritmespan om die optimalisering van CDS-streekkodons te voltooi;
- Volwasse en Volmaakte Proses circRNA kan bereik word met hoë sikliseringsdoeltreffendheid, hoë stabiliteit en hoë translasiedoeltreffendheid.
Gevallestudie
Yaohai Bio-Pharma het die beheerproduk verbeterde groen fluoresserende proteïen (eGFP) circRNA bekendgestel, wat gebaseer is op die PIE-stelsel om die siklisering van RNA te bewerkstellig.
Met behulp van 'n konvensionele transfekteringsreagens word eGFP circRNA in 293T-selle getransfekteer, en eGFP (groen) fluoresserende sein kan na 24 uur opgespoor word, wat na 48 uur versterk sal word. Die fluoresserende sein kan steeds op die 7de dag en die 14de dag daarna opgespoor word transfeksie.
In vitro uitdrukking validering van eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
